д-р биол. наук, профессор, рук. лаборатории изосерологии
Россия, 191024, г. Санкт-Петербург, 2-я Советская ул., 16
д-р мед. наук, профессор, директор
Россия, 191024, г. Санкт-Петербург, 2-я Советская ул., 16
Актуальность. Антигены нейтрофилов человека (Human neutrophil antigens, НNА) локализованы на гликопротеинах, расположенных на поверхностной мембране нейтрофилов. Иммунизация к HNA во время беременности или вследствие трансфузий компонентов крови может привести к выработке аллоантител. Одним из факторов развития аллоиммунизации является частота встречаемости HNA. B связи с этим представляется важным изучить особенности распределения аллелей и генотипов HNA у доноров и больных гематологическими заболеваниями г. Санкт-Петербурга для прогнозирования риска аллоиммунизации.
Цель. Оценить риск HNA аллоиммунизации у доноров и больных гематологическими заболеваниями г. Санкт-Петербурга на основании изучения частот встречаемости аллелей и генотипов HNA.
Материалы и методы. Материалом исследования служили образцы периферической крови 303 доноров г. Санкт-Петербурга и 302 больных гематологическими заболеваниями, получавших терапию в Российском научно-исследовательском институте гематологии и трансфузиологии. Геномная ДНК была выделена из цельной крови методом многоступенчатой очистки с использованием реактива цетилтриметиламмония бромида. Типирование HNA проводили методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции с использованием разработанных олигонуклеотидных праймеров. Сравнения частот встречаемости генотипов HNA у доноров, больных гематологическими заболеваниями, и представителей других популяций проводили с помощью критерия согласия Пирсона χ2.
Результаты. Частота встречаемости аллеля HNA-1bd составила 0,584–0,588, а HNA-1а – 0,376–0,384. Частота встречаемости аллеля HNA-1bс составила 0,032–0,036, и данный аллель был представлен в генотипах HNA-1а/bc/bd (0,023–0,036)00, HNA-1а/bc (0,020–0,043) и HNA-1bc/bd (0,007–0,010). Генотипы HNA-1bс/bc и HNA-1null выявлены не были. Аллель «а» систем HNA-3, -4, -5 встречался у большинства исследуемых в каждой группе (0,795–0,804; 0,887–0,898; 0,699–0,708 соответственно). На основании полученных частот встречаемости аллелей и генотипов рассчитали вероятность аллоиммунизации к HNA. Наибольшая величина расчетного риска аллоиммунизации при трансфузиях компонентов крови отмечена при отсутствии в генотипе аллелей HNA-5b, HNA-1a, HNA-3b, HNA-4b и составляет 0,250; 0,233; 0,231 и 0,163 соответственно, что подтверждает результаты аналогичных исследований.
Заключение. Статистически значимых различий в частоте встречаемости аллелей и генотипов HNA-1, -3, -4, -5 у доноров г. Санкт-Петербурга и больных гематологическими заболеваниями не установлено. Наибольшая величина расчетного риска аллоиммунизации при трансфузиях компонентов крови, полученная на основании частот встречаемости аллелей и генотипов, отмечена при отсутствии в генотипе аллелей HNA-5b, HNA-1a, HNA-3b, HNA-4b. Полученные данные согласуются с результатами исследований распределения аллелей и генотипов систем HNA в популяции европейцев и значимо отличаются от популяций Восточной и Юго-Восточной Азии, Африки и Южной Америки. Предложенный метод типирования HNA может быть использован для создания клеточной панели, типированной по антигенам нейтрофилов, с целью определения специфичности аллоантител у доноров, и для диагностики аллоиммунных конфликтов в педиатрии, трансфузиологии и трансплантологии.
Relevance. Human neutrophil antigens (HNAs) are localized on glycoproteins which are positioned on the surface membrane of human neutrophils. Alloantibodies against HNA are implicated in a number of clinical conditions, including immune-mediated neutropenia and transfusion reactions. Genotyping for HNA systems is important in the diagnosis of disorders involving alloimmunization to HNA.
Aim. To assess the risk of HNA alloimmunization in donors and patients with hematological diseases in St. Petersburg based on the study of HNA allele and genotype frequencies.
Materials and methods. DNA samples of 303 blood donors and 302 hematological patients were obtained and typed for HNA-1, -3, -4, -5. Polymerase chain reactions with homemade sequence-specific primers were used for typing. Genomic DNA was isolated from whole blood by a multistage purification method using the CTAB reagent. The results were detected in real time using the EVAGreen intercalating dye. Pearson’s chi-squared test was used to compare the HNA genotype frequencies in donors, patients with hematological diseases and in other populations.
Results. In the study, the frequency of HNA-1bd allele was 0.584–0.588, of HNA-1a – 0.376–0.384, of HNA- 1bc – 0.032–0.036. HNA-1bc allele was represented in the genotypes HNA-1a/bc/bd (0.023–0.036), HNA-1a/bc (0.020–0.043) and HNA-1bc/bd (0.007–0.010). The genotypes HNA-1bc/bc and HNA-1null were not identified. Allele “a” of HNA-3, -4, -5 systems was found in the majority of studied individuals (0.795–0.804; 0.887–0.898; 0.699–0.708). The highest calculated risk of HNA alloimmunization was noted in the absence of HNA-5b, HNA- 1a, HNA-3b, and HNA-4b alleles in the genotype and was 0.250, 0.233, 0.231, and 0.163, respectively.
Conclusions. Our data are consistent with the results of studies on the HNA allele and genotype frequencies in populations of Europeans and are significantly different from those of East and Southeast Asia, Africa and South America. The frequencies of HNA-1, -3, -4, -5 alleles and genotypes among donors in St. Petersburg and patients with hematological diseases did not have statistically significant differences. It was shown that the highest calculated risk of alloimmunization was observed in the absence of HNA-5b, HNA-1a, HNA-3b, and HNA-4b alleles in the genotype. These data are consistent with the results of similar studies on populations of white Europeans conducted by other authors.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.