ssmuБюллетень сибирской медициныBulletin of Siberian Medicine1682-03631819-3684Siberian State Medical University, the Ministry of Healthcare of the Russian Federation10.20538/1682-0363-2024-1-37-47ssmu-5523Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL PAPERSИсследование транскриптома плоскоклеточного рака головы и шеи после протонного облученияStudy of head and neck squamous cell carcinoma transcriptome after proton therapyhttps://orcid.org/0000-0002-8226-0433ДжуманиязоваЭ. Д.JumaniyazovaE. D.

Джуманиязова Энар Денисовна – ассистент, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, Медицинский институт, стажер-исследователь, лаборатория молекулярной патофизиологии клетки

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198

enar2017@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8650-8240ВишняковаП. А.VishnyakovaP. A.

Вишнякова Полина Александровна – канд. биол. наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии, Медицинский институт, РУДН; зав. лабораторией регенеративной медицины, НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова; зав. лабораторией молекулярной патофизиологии клетки, НИИ МКМ РУДН

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6,

117997, г. Москва, ул. Академика Опарина, 4

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198,

4, Akademika Oparina Str., Moscow, 117997

p_vishnyakova@oparina4.ruhttps://orcid.org/0009-0008-3659-0360ЧирковаМ. В.ChirkovaM. V.

Чиркова Мирослава Васильевна – лаборант

109004, г. Москва, ул. Александра Солженицына, 25

25, Aleksandra Solzhenitsyna Str., Moscow, 109004

mirachirkova@ispras.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6771-2163КарпулевичЕ. А.KarpulevichE. A.

Карпулевич Евгений Андреевич – науч. сотрудник, ИСП РАН

109004, г. Москва, ул. Александра Солженицына, 25

25, Aleksandra Solzhenitsyna Str., Moscow, 109004

karpulevich@ispras.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5093-6232ЕреминаИ. З.EreminaI. Z.

Еремина Ирина Здиславовна – канд. биол. наук, доцент, зав. учебной частью, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, Медицинский институт

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198

eremina_iz@rudn.universityhttps://orcid.org/0000-0002-2759-297XГордонК. Б.GordonK. B.

Гордон Константин Борисович – канд. мед. наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии, Медицинский институт, РУДН, врач-радиотерапевт, науч. сотрудник, отделение протонной и фотонной терапии, МРНЦ им. А. Цыба

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6,

249036, г. Обнинск, ул. Маршала Жукова, 10

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198,

10, Marshala Zhukova Str., Obninsk, 249036

drgordonkb@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-8784-8415КапринА. Д.KaprinA. D.

Каприн Андрей Дмитриевич – д-р мед. наук, академик РАН, зав. кафедрой онкологии и рентгенорадиологии им. акад. РАН В.П. Харченко, Медицинский институт, РУДН; генеральный директор «НМИЦ радиологии»

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6,

249036, г. Обнинск, ул. Королева, 4

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198,

4, Koroleva Str., Obninsk, 249036

kaprin-ad@rudn.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6498-5764ФатхудиновТ. Х.FatkhudinovT. H.

Фатхудинов Тимур Хайсамудинович – д-р мед. наук, профессор, зав. кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии, зам. директора по научной работе, Медицинский институт РУДН; зам. директора НИИМЧ им. академика А.П. Авцына; директор НИИ МКМ РУДН

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6,

117418, г. Москва, ул. Цюрупы, 3

6, Miklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198,

3, Tsyurupy Str., Moscow, 117418

tfat@yandex.ruНаучно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины Российского университета дружбы народов (НИИ МКМ РУДН)РоссияResearch Institute of Molecular and Cellular Medicine of the Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN Research Institute of MCM)Russian FederationНаучно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины Российского университета дружбы народов (НИИ МКМ РУДН); Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии (НМИЦ АПГ) им. акад. В.И. КулаковаРоссияResearch Institute of Molecular and Cellular Medicine of the Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN Research Institute of MCM); National Medical Research Center of Obstetrics, Gynecology and Perinatology named after Academician V.I. KulakovRussian FederationИнститут системного программирования им. В.П. Иванникова Российской академии наукРоссияIvannikov Institute for System Programming of the Russian Academy of Sciences (ISP RAS)Russian FederationНаучно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины Российского университета дружбы народов (НИИ МКМ РУДН); Медицинский радиологический научный центр (МРНЦ) им. А. Цыба – филиал Национального медицинского исследовательского центра радиологии (филиал «НМИЦ радиологии»)РоссияResearch Institute of Molecular and Cellular Medicine of the Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN Research Institute of MCM); A. Tsyb Medical Radiological Research Center – branch of FGBU National Medical Research Center of Radiology (a branch of FGBU National Medical Research Center of Radiology)Russian FederationНаучно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины Российского университета дружбы народов (НИИ МКМ РУДН); Национальный медицинский исследовательский центр (НМИЦ) радиологииРоссияResearch Institute of Molecular and Cellular Medicine of the Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN Research Institute of MCM); National Medical Research Center of Radiology (NMC Radiology of the Ministry)Russian FederationНаучно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины Российского университета дружбы народов (НИИ МКМ РУДН); Научно-исследовательский институт морфологии человека (НИИМЧ) им. акад. А.П. АвцынаРоссияResearch Institute of Molecular and Cellular Medicine of the Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN Research Institute of MCM); Avtsyn Research Institute of Human MorphologyRussian Federation2024100420242313747Copyright © Джуманиязова Э.Д., Вишнякова П.А., Чиркова М.В., Карпулевич Е.А., Еремина И.З., Гордон К.Б., Каприн А.Д., Фатхудинов Т.Х., 20242024Джуманиязова Э.Д., Вишнякова П.А., Чиркова М.В., Карпулевич Е.А., Еремина И.З., Гордон К.Б., Каприн А.Д., Фатхудинов Т.Х.Jumaniyazova E.D., Vishnyakova P.A., Chirkova M.V., Karpulevich E.A., Eremina I.Z., Gordon K.B., Kaprin A.D., Fatkhudinov T.H.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://bulletin.ssmu.ru/jour/article/view/5523

Цель – оценить изменения транскриптома клеток ткани плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ) у пациентов после протонного облучения.

Материалы и методы

Материалы и методы. Биопсийный материал, полученный от трех пациентов ПРГШ до и после протонного облучения в суммарной дозе 10 изоГр, был подвергнут гомогенизации, очистке и концентрации. После чего была выделена тотальная РНК с последующей очисткой и концентрацией набором RNA Clean & Concentrator (Zymo Research), количество оценивали с помощью прибора Qubit 2.0 (Invitrogen, Life Technologies). После выделения тотальной РНК из 1 мкг для секвенирования на платформе Illumina были приготовлены библиотеки с использованием набора TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 с этапом обогащения в 10 циклов в соответствии с рекомендациями производителя. Качество РНК и полученных библиотек проверялось с помощью системы капиллярного электрофореза Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Tec. Inc., США). Параметр RIN для РНК составлял не менее 7. Концентрацию библиотек оценивали с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени на приборе CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, США). Окончательные библиотеки объединяли в эквимолярных пропорциях перед секвенированием на платформе Illumina HiSeq 2500 с использованием парно-концевых прочтений по 50 оснований. Параметр Q20 для всех образцов составил более 97%, а количество прочтений в среднем равнялось 60,2 млн на образец. Cырые прочтения были обработаны с использованием RTA 1.17.21.3 и Casava 1.8.2 (Illumina). Анализ обогащения был выполнен с помощью программного обеспечения PANTHER 17.0.

Результаты

Результаты. В ходе транскриптомного анализа ПРГШ после пятикратного облучения пациентов протонами (2 изоГр) в суммарной дозе 10 изоГр было обнаружено 1 414 значимо дифференциально экспрессированных генов. Выделены 10 наиболее и наименее экспрессируемых генов и ассоциированные с ними сигнальные пути. В ПРГШ после облучения протонами обнаружен ряд сигнальных путей, связанных с низкоэкспрессированными генами, таких как STAT5; сигнальный путь PD-1; отмечена MET-опосредованная активация сигнального пути PTK2, передача сигналов PDGF; CD22-опосредованная регуляция BCR; активация MAPK, опосредованная FCERI. Кроме вышеназванных сигнальных путей обращает на себя внимание активация процесса распада коллагена, FCGR3A-опосредованного фагоцитоза и FCGR3A-опосредованного синтеза интерлейкина-10 (IL10). При анализе обогащения среди высокоэкспрессируемых генов в ткани ПРГШ после протонного облучения были активированы процессы ороговения и биологического окисления.

Заключение

Заключение. Облучение протонами при ПРГШ приводит к гиперэкспрессии генов, вовлеченных в регуляцию процессов ороговения и биологического окисления; гипоэкспрессии генов, связанных с подавлением сигнальных путей: STAT5, PD-1, MET-опосредованной активации сигнального пути PTK2, передачи сигналов PDGF; CD22-опосредованной регуляции BCR; активации MAPK, опосредованной FCERI, процесса распада коллагена, активации FCGR3A-опосредованного фагоцитоза и FCGR3A-опосредованного синтеза IL10. Все сигнальные пути гипоэкспрессированных генов функционируют в клетках ПРГШ, если негативного влияния на опухоль не оказывается извне (облучение или поступление противоопухолевых препаратов). Преобладание подавленных сигнальных путей над активированными, вероятнее всего, свидетельствует о снижении функционального потенциала клеток после облучения протонами. Дозозависимость эффектов ПТ обусловливает необходимость дальнейшего изучения изменений клеточных и молекулярно-генетических сигнатур ПРГШ после протонного облучения разными дозами.

Aim

Aim. To evaluate changes in the transcriptome of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) tissue cells in patients after proton therapy.

Materials and methods

Materials and methods. Biopsy material obtained from 3 HNSCC patients before and after proton therapy at a total dose of 10 isoGy was homogenized, purified, and concentrated. Then total RNA was isolated with further purification and concentration with the RNA Clean & Concentrator kit (Zymo Research). Library quantitation was assessed using the Qubit 2.0 instrument (Invitrogen, Life Technologies). After isolation of 1 μg total RNA for sequencing, libraries were prepared on the Illumina platform using the TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 with a 10-cycle enrichment step according to the manufacturer’s recommendations. The quality of RNA and the resulting libraries was checked using the Agilent 2100 Bioanalyzer system (Agilent Tec. Inc., USA). The RIN parameter for RNA was at least 7. The library concentration was assessed by real-time PCR on the CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, USA). Final libraries were pooled in equimolar ratios before sequencing on the Illumina HiSeq 2500 platform using 50 base-pair paired-end reads. The Q20 parameter for all samples was > 97%, and the number of reads averaged 60.2 million per sample. Raw reads were processed using the RTA 1.17.21.3 and Casava 1.8.2 (Illumina). The enrichment analysis was performed using the PANTHER 17.0 software.

Results

Results. The transcriptome analysis of HNSCC after proton radiation therapy (5 x 2 isoGy) at a total dose of 10 isoGy revealed 1,414 significantly differentially expressed genes. The 10 most and least expressed genes and their associated signaling pathways were identified. A number of signaling pathways associated with the underexpressed genes were detected in HNSCC after proton therapy, such as: STAT5; PD-1 signaling pathway; marked MET-mediated activation of PTK2 signaling pathway, PDGF signaling; CD22-mediated regulation of BCR; and FCERI-mediated MAPK activation. In addition to the above signaling pathways, activation of collagen degradation, FCGR3A-mediated phagocytosis, and FCGR3A-mediated interleukin (IL)-10 synthesis are of interest. In the enrichment analysis among highly expressed genes, keratinization and biological oxidation processes were activated in HNSCC tissues after proton therapy.

Conclusion

Conclusion. Proton therapy in HNSCC leads to overexpression of genes involved in the regulation of keratinization and biological oxidation processes as well as to underexpression of genes associated with suppression of signaling pathways: STAT5, PD-1, MET-mediated activation of PTK2 signaling pathway, PDGF signaling; CD22-mediated regulation of BCR; FCERI-mediated MAPK activation, collagen degradation, FCGR3A-mediated phagocytosis activation, and FCGR3A-mediated IL-10 synthesis. All signaling pathways of underexpressed genes function in HNSCC cells if there is no negative influence on the tumor from outside (irradiation or delivery of antitumor drugs). The predominance of suppressed signaling pathways over activated ones most likely indicates a decrease in the functional potential of cells after proton therapy. The dose-dependence of PT effects necessitates further study of changes in cellular and molecular-genetic signatures of HNSCC after proton irradiation with different doses.

 

 

плоскоклеточный рак головы и шеитранскриптомпротонное облучениесигнальные путиhead and neck squamous cell carcinomatranscriptomeproton therapysignaling pathwaysРабота выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-15-2021-1356 от 7.10.2021 (идентификатор РФ 0951.61321X0012, № 15.CИН.21.0011)). Обсчеты выполнены при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-15-2022-294 от 15.04.2022)The study was supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (agreement No. 075-15-2022-294 dated April 15, 2022) and the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, agreement No. 075-15-2021-1356 dated October 7, 2021 (identifier RF 0951.61321X0012, No. 15.SIN.21.0011)ReferencesSung H., Ferlay J., Siegel R.L., Laversanne M., Soerjomataram I., Jemal A., Bray F. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: a Cancer Journal for Clinicians. 2021;71(3):209–249. DOI: 10.3322/caac.21660.Sung H., Ferlay J., Siegel R.L., Laversanne M., Soerjomataram I., Jemal A., Bray F. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: a Cancer Journal for Clinicians. 2021;71(3):209–249. DOI: 10.3322/caac.21660.Bhat G.R., Hyole R.G., Li J. Head and neck cancer: Current challenges and future perspectives. In Advances in Cancer Research. 2021;152(1):67–102. DOI: 10.1016/bs.acr.2021.05.002.Bhat G.R., Hyole R.G., Li J. Head and neck cancer: Current challenges and future perspectives. In Advances in Cancer Research. 2021;152(1):67–102. DOI: 10.1016/bs.acr.2021.05.002.Johnson D.E., Burtness B., Leemans C.R., Lui W.Y., Bauman J.E., Grandis J.R. Head and neck squamous cell carcinoma. Nature Reviews Disease Primers. 2020;6(1):92–112. DOI: 10.1038/s41572-020-00224-3.Johnson D.E., Burtness B., Leemans C.R., Lui W.Y., Bauman J.E., Grandis J.R. Head and neck squamous cell carcinoma. Nature Reviews Disease Primers. 2020;6(1):92–112. DOI: 10.1038/s41572-020-00224-3.Lozano R., Naghavi M., Foreman K., Lim S., Shibuya K., Aboyans V. et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 2012;380(9859):2095–2128. DOI: 10.1016/S0140-6736(12)61728-0.Lozano R., Naghavi M., Foreman K., Lim S., Shibuya K., Aboyans V. et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 2012;380(9859):2095–2128. DOI: 10.1016/S0140-6736(12)61728-0.Borras J.M., Barton M., Grau C., Corral J., Verhoeven R., Lemmens V. et al. The impact of cancer incidence and stage on optimal utilization of radiotherapy: Methodology of a population based analysis by the ESTRO-HERO project. Radiotherapy and Oncology. 2015;116(1):45–50. DOI: 10.1016/j.radonc.2015.04.021.Borras J.M., Barton M., Grau C., Corral J., Verhoeven R., Lemmens V. et al. The impact of cancer incidence and stage on optimal utilization of radiotherapy: Methodology of a population based analysis by the ESTRO-HERO project. Radiotherapy and Oncology. 2015;116(1):45–50. DOI: 10.1016/j.radonc.2015.04.021.Vitti E.T., Parsons J.L. The radiobiological effects of proton beam therapy: Impact on DNA damage and repair. Cancers. 2019;11(7):1–15. DOI: 10.3390/cancers11070946.Vitti E.T., Parsons J.L. The radiobiological effects of proton beam therapy: Impact on DNA damage and repair. Cancers. 2019;11(7):1–15. DOI: 10.3390/cancers11070946.Răileanu M., Straticiuc M., Iancu D.A., Andrei R.F. Proton irradiation induced reactive oxygen species promote morphological and functional changes in HepG2 cells. Journal of Structural Biology. 2022;214(4):1–11. DOI: 10.1016/j.jsb.2022.107919.Răileanu M., Straticiuc M., Iancu D.A., Andrei R.F. Proton irradiation induced reactive oxygen species promote morphological and functional changes in HepG2 cells. Journal of Structural Biology. 2022;214(4):1–11. DOI: 10.1016/j.jsb.2022.107919.Alan Mitteer R., Wang Y., Shah J., Gordon S., Fager M., Butter P.P. et al. Proton beam radiation induces DNA damage and cell apoptosis in glioma stem cells through reactive oxygen species. Scientific Reports. 2015;5(1):1–12. DOI: 10.1038/srep13961.Alan Mitteer R., Wang Y., Shah J., Gordon S., Fager M., Butter P.P. et al. Proton beam radiation induces DNA damage and cell apoptosis in glioma stem cells through reactive oxygen species. Scientific Reports. 2015;5(1):1–12. DOI: 10.1038/srep13961.Jumaniyazova E.D., Smyk D.I., Vishnyakova P.A., Fatkhudinov T.Kh., Gordon K.B. Photon-and proton-mediated biological effects: what has been learned? Life. 2022;3(1):30–46. DOI: 10.3390/life13010030.Jumaniyazova E.D., Smyk D.I., Vishnyakova P.A., Fatkhudinov T.Kh., Gordon K.B. Photon-and proton-mediated biological effects: what has been learned? Life. 2022;3(1):30–46. DOI: 10.3390/life13010030.Nuyts S., Bollen H., Ng S.P., Corry J., Eisbruch A., Mendenhall W.M. et al. Proton therapy for squamous cell carcinoma of the head and neck: early clinical experience and current challenges. Cancers. 2022;14(11):1–18. DOI: 10.3390/cancers14112587.Nuyts S., Bollen H., Ng S.P., Corry J., Eisbruch A., Mendenhall W.M. et al. Proton therapy for squamous cell carcinoma of the head and neck: early clinical experience and current challenges. Cancers. 2022;14(11):1–18. DOI: 10.3390/cancers14112587.Holliday E.B., Garden A.S., Rosenthal D.I., Fuller C.D., Morrison W.H., Gunn G.B. et al. Proton therapy reduces treatment-related toxicities for patients with nasopharyngeal cancer: a case-match control study of intensity-modulated proton therapy and intensity-modulated photon therapy. International Journal of Particle Therapy. 2015;2(1):19–28. DOI: 10.14338/IJPT-15-00011.1.Holliday E.B., Garden A.S., Rosenthal D.I., Fuller C.D., Morrison W.H., Gunn G.B. et al. Proton therapy reduces treatment-related toxicities for patients with nasopharyngeal cancer: a case-match control study of intensity-modulated proton therapy and intensity-modulated photon therapy. International Journal of Particle Therapy. 2015;2(1):19–28. DOI: 10.14338/IJPT-15-00011.1.Tian X., Liu K., Hou Y., Cheng J., Zhang J. The evolution of proton beam therapy: Current and future status. Molecular and Clinical Oncology. 2018;8(1):15–21. DOI: 10.3892/mco.2017.1499.Tian X., Liu K., Hou Y., Cheng J., Zhang J. The evolution of proton beam therapy: Current and future status. Molecular and Clinical Oncology. 2018;8(1):15–21. DOI: 10.3892/mco.2017.1499.Stupnikov A., Sizykh A., Budkina A., Sizykh А., Budkina A., Favorov A. et al. Hobotnica: exploring molecular signature quality [version 2; peer review: 2 approved]. F1000Research. 2022:10:1260. DOI: 10.12688/f1000research.74846.2.Stupnikov A., Sizykh A., Budkina A., Sizykh А., Budkina A., Favorov A. et al. Hobotnica: exploring molecular signature quality [version 2; peer review: 2 approved]. F1000Research. 2022:10:1260. DOI: 10.12688/f1000research.74846.2.Rodon J., Soria J.C., Berger R., Miller W.H., Rubin E., Kugel A. et al. Genomic and transcriptomic profiling expands precision cancer medicine: the WINTHER trial. Nature Medicine. 2019;25(5):751–758. DOI: 10.1038/s41591-019-0424-4.Rodon J., Soria J.C., Berger R., Miller W.H., Rubin E., Kugel A. et al. Genomic and transcriptomic profiling expands precision cancer medicine: the WINTHER trial. Nature Medicine. 2019;25(5):751–758. DOI: 10.1038/s41591-019-0424-4.Worst B.C., van Tilburg C.M., Balasubramanian G.P., Fiesel P., Witt R., Freitag A. et al. S. Next-generation personalised medicine for high-risk paediatric cancer patients– The INFORM pilot study. European Journal of Cancer. 2016;65(1):91–101. DOI: 10.1016/j.ejca.2016.06.009.Worst B.C., van Tilburg C.M., Balasubramanian G.P., Fiesel P., Witt R., Freitag A. et al. S. Next-generation personalised medicine for high-risk paediatric cancer patients– The INFORM pilot study. European Journal of Cancer. 2016;65(1):91–101. DOI: 10.1016/j.ejca.2016.06.009.Choi S., Myers J.N. Molecular pathogenesis of oral squamous cell carcinoma: implications for therapy. Journal of Dental Research. 2008;87(1):14–32. DOI: 10.1177/154405910808700104.Choi S., Myers J.N. Molecular pathogenesis of oral squamous cell carcinoma: implications for therapy. Journal of Dental Research. 2008;87(1):14–32. DOI: 10.1177/154405910808700104.Koppikar P., Lui V.W.Y., Man D., Xi S., Chai R.L., Nelson E. et al. Constitutive activation of STAT5 contributes to tumor growth, epithelial-mesenchymal transition, and resistance to EGFR targeting. Clinical Cancer Research. 2008;14(23):7682– 7690. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-08-1328.Koppikar P., Lui V.W.Y., Man D., Xi S., Chai R.L., Nelson E. et al. Constitutive activation of STAT5 contributes to tumor growth, epithelial-mesenchymal transition, and resistance to EGFR targeting. Clinical Cancer Research. 2008;14(23):7682– 7690. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-08-1328.Zhou J., Yi Q., Tang, L. The roles of nuclear focal adhesion kinase (FAK) on Cancer: a focused review. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 2019;38(1):1–11. DOI: 10.1186/s13046-019-1265-1.Zhou J., Yi Q., Tang, L. The roles of nuclear focal adhesion kinase (FAK) on Cancer: a focused review. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 2019;38(1):1–11. DOI: 10.1186/s13046-019-1265-1.Zhang Z., Li J., Jiao S., Han G., Zhu J., Liu T. Functional and clinical characteristics of focal adhesion kinases in cancer progression. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2022;10(1):1040311–1040335. DOI: 10.3389/fcell.2022.1040311.Zhang Z., Li J., Jiao S., Han G., Zhu J., Liu T. Functional and clinical characteristics of focal adhesion kinases in cancer progression. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2022;10(1):1040311–1040335. DOI: 10.3389/fcell.2022.1040311.Skinner H.D., Giri U., Yang L., Woo S.H., Story M.D., Pickering C.R. et al. Proteomic profiling identifies PTK2/FAK as a driver of radioresistance in HPV-negative head and neck cancer. Clinical Cancer Research. 2016;22(18):4643–4650. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-2785.Skinner H.D., Giri U., Yang L., Woo S.H., Story M.D., Pickering C.R. et al. Proteomic profiling identifies PTK2/FAK as a driver of radioresistance in HPV-negative head and neck cancer. Clinical Cancer Research. 2016;22(18):4643–4650. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-2785.Chen L., Han X. Anti-PD-1/PD-L1 therapy of human cancer: past, present, and future. The Journal of Clinical Investigation. 2015;125(9):3384–3391. DOI: 10.1172/JCI80011.Chen L., Han X. Anti-PD-1/PD-L1 therapy of human cancer: past, present, and future. The Journal of Clinical Investigation. 2015;125(9):3384–3391. DOI: 10.1172/JCI80011.Cui P., Jing P., Liu X., Xu W. Prognostic significance of PD-L1 expression and its tumor-intrinsic functions in hypopharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer Management and Research. 2020;1:5893–5902. DOI: 10.2147/CMAR.S257299.Cui P., Jing P., Liu X., Xu W. Prognostic significance of PD-L1 expression and its tumor-intrinsic functions in hypopharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer Management and Research. 2020;1:5893–5902. DOI: 10.2147/CMAR.S257299.Han Y., Liu D., Li L. PD-1/PD-L1 pathway: current researches in cancer. American Journal of Cancer Research. 2020;10(3):727–742.Han Y., Liu D., Li L. PD-1/PD-L1 pathway: current researches in cancer. American Journal of Cancer Research. 2020;10(3):727–742.Howell W.M., Rose-Zerilli M.J. Cytokine gene polymorphisms, cancer susceptibility, and prognosis. The Journal of Nutrition. 2007;137(1):194S–199S. DOI: 10.1093/jn/137.1.194S.Howell W.M., Rose-Zerilli M.J. Cytokine gene polymorphisms, cancer susceptibility, and prognosis. The Journal of Nutrition. 2007;137(1):194S–199S. DOI: 10.1093/jn/137.1.194S.Jiang Y. IL10 receptor is a novel therapeutic target in DLBCLs. Leukemia. 2015;29(8):1684–1694. DOI: 10.1038/leu.2015.57.Jiang Y. IL10 receptor is a novel therapeutic target in DLBCLs. Leukemia. 2015;29(8):1684–1694. DOI: 10.1038/leu.2015.57.Han Y., Ding Z., Chen B., Liu Y., Liu Y. A novel inflammatory response–related gene signature improves high-risk survival prediction in patients with head and neck squamous cell carcinoma. Frontiers in Genetics. 2022;13(1):1–15. DOI: 10.3389/fgene.2022.767166.Han Y., Ding Z., Chen B., Liu Y., Liu Y. A novel inflammatory response–related gene signature improves high-risk survival prediction in patients with head and neck squamous cell carcinoma. Frontiers in Genetics. 2022;13(1):1–15. DOI: 10.3389/fgene.2022.767166.Heldin C.H. Targeting the PDGF signaling pathway in tumor treatment. Cell Communication and Signaling. 2013;11:1–18. DOI: 10.1186/1478-811X-11-97.Heldin C.H. Targeting the PDGF signaling pathway in tumor treatment. Cell Communication and Signaling. 2013;11:1–18. DOI: 10.1186/1478-811X-11-97.Pietras K., Sjöblom T., Rubin K., Heldin C.H., Östman A. PDGF receptors as cancer drug targets. Cancer Cell. 2003;3(5):439–443. DOI: 10.1016/s1535-6108(03)00089-8.Pietras K., Sjöblom T., Rubin K., Heldin C.H., Östman A. PDGF receptors as cancer drug targets. Cancer Cell. 2003;3(5):439–443. DOI: 10.1016/s1535-6108(03)00089-8.Lindahl P., Johansson B.R., Leveen P., Betsholtz C. Pericyte loss and microaneurysm formation in PDGF-B-deficient mice. Science. 1997;277(5323):242–245. DOI: 10.1126/science.277.5323.242.Lindahl P., Johansson B.R., Leveen P., Betsholtz C. Pericyte loss and microaneurysm formation in PDGF-B-deficient mice. Science. 1997;277(5323):242–245. DOI: 10.1126/science.277.5323.242.Heldin C.H., Rubin K., Pietras K., Östman A. High interstitial fluid pressure—an obstacle in cancer therapy. Nature Reviews Cancer. 2004;4(10):806–813. DOI: 10.1038/nrc1456.Heldin C.H., Rubin K., Pietras K., Östman A. High interstitial fluid pressure—an obstacle in cancer therapy. Nature Reviews Cancer. 2004;4(10):806–813. DOI: 10.1038/nrc1456.Braicu C., Buse M., Busuioc C., Drula R., Gulei D., Raduly L. et al. A comprehensive review on MAPK: a promising therapeutic target in cancer. Cancers. 2019;11(10):1–25. DOI: 10.3390/cancers11101618.Braicu C., Buse M., Busuioc C., Drula R., Gulei D., Raduly L. et al. A comprehensive review on MAPK: a promising therapeutic target in cancer. Cancers. 2019;11(10):1–25. DOI: 10.3390/cancers11101618.Theocharis S., Kotta-Loizou I., Klijanienko J., Giaginis C., Alexandrou P., Rodriguez J. et al. Extracellular signal-regulated kinase (ERK) expression and activation in mobile tongue squamous cell carcinoma: associations with clinicopathological parameters and patients survival. Tumor Biology. 2014;35:6455–6465. DOI: 10.1007/s13277-014-1853-9.Theocharis S., Kotta-Loizou I., Klijanienko J., Giaginis C., Alexandrou P., Rodriguez J. et al. Extracellular signal-regulated kinase (ERK) expression and activation in mobile tongue squamous cell carcinoma: associations with clinicopathological parameters and patients survival. Tumor Biology. 2014;35:6455–6465. DOI: 10.1007/s13277-014-1853-9.Kaneko T., Zeng P.Y., Liu X., Abdo R., Barrett J.W., Zhang Q. et al. Proteome and phosphoproteome signatures of recurrence for HPV+ head and neck squamous cell carcinoma. Communications Medicine. 2022;2(1):95–110. DOI: 10.1038/s43856-022-00159-8.Kaneko T., Zeng P.Y., Liu X., Abdo R., Barrett J.W., Zhang Q. et al. Proteome and phosphoproteome signatures of recurrence for HPV+ head and neck squamous cell carcinoma. Communications Medicine. 2022;2(1):95–110. DOI: 10.1038/s43856-022-00159-8.Cooper T., Biron V.L., Adam B., Klimowicz A.C., Puttagunta L., Seikaly H. Association of keratinization with 5-year disease-specific survival in oropharyngeal squamous cell carcinoma. JAMA Otolaryngol Head Neck Surg. 2015;141(3):250– 256. DOI: 10.1001/jamaoto.2014.3335.Cooper T., Biron V.L., Adam B., Klimowicz A.C., Puttagunta L., Seikaly H. Association of keratinization with 5-year disease-specific survival in oropharyngeal squamous cell carcinoma. JAMA Otolaryngol Head Neck Surg. 2015;141(3):250– 256. DOI: 10.1001/jamaoto.2014.3335.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.