ssmuБюллетень сибирской медициныBulletin of Siberian Medicine1682-03631819-3684Siberian State Medical University, the Ministry of Healthcare of the Russian Federation10.20538/1682-0363-2024-3-16-24ssmu-5733Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL PAPERSОценка функциональной пригодности лиофилизата таргетных каркасных белков с анкириновыми повторами для радионуклидной визуализации гиперэкспрессии HER2/neu в злокачественных опухоляхAssessing functional suitability of a lyophilized formulation containing designed ankyrin repeat proteins for radionuclide imaging of HER2/neu overexpression in malignant tumorshttps://orcid.org/0009-0002-4282-3198ВарвашеняР. Н.VarvashenyaR. N.

Варвашеня Руслан Николаевич – аспирант, лаборант-исследователь, Научно-образовательная лаборатория химико-фармацевтических исследований, СибГМУ

634050, г. Томск, Московский тракт, 2; 634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30

Science and Education Laboratory for Chemical and Pharmaceutical Research, SibMed

2, Moscow Trakt, 634050; 30, Lenina Av., Tomsk, 634050

mr.varvashenya@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6975-2361ПрачА. А.PrachA. A.

Прач Анастасия Александровна – аспирант, Исследовательская школа химических и биомедицинских технологий

634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30

30, Lenina Av., Tomsk, 634050

nastya.prach@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4374-6422ПлотниковЕ. B.PlotnikovE. V.

Плотников Евгений Владимирович – канд. хим. наук, доцент, Исследовательская школа химических и биомедицинских технологий

634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30

30, Lenina Av., Tomsk, 634050

plotnikovev@tpu.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3952-0631ДеевС. М.DeevS. M.

Деев Сергей Михайлович – д-р биол. наук, профессор, академик РАН, руководитель лаборатории молекулярной иммунологии ИБХ им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30; 117997, г. Москва, ГСП-7, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

30, Lenina Av., Tomsk, 634050; 16/10, Miklukho – Maklaya Str., Moscow, 117997

biomem@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2153-7945БелоусовМ. В.BelousovM. V.

Белоусов Михаил Валерьевич – д-р фармацевт. наук, профессор, зав. кафедрой фармацевтического анализа, СибГМУ

634050, г. Томск, Московский тракт, 2; 634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30

Science and Education Laboratory for Chemical and Pharmaceutical Research, SibMed

2, Moscow Trakt, 634050; 30, Lenina Av., Tomsk, 634050

belousov.mv@ssmu.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1176-2441ЛарькинаМ. С.LarkinaM. S.

анализа, СибГМУ, г. Томск, belousov.mv@ssmu.ru, http://orcid.org/0000-0002-2153-7945

Ларькина Мария Сергеевна – д-р фармацевт. наук, профессор, кафедра фармацевтического анализа, СибГМУ

634050, г. Томск, Московский тракт, 2; 634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30

Science and Education Laboratory for Chemical and Pharmaceutical Research, SibMed

2, Moscow Trakt, 634050; 30, Lenina Av., Tomsk, 634050

marialarkina@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8753-7916ЧерновВ. И.ChernovV. I.

Чернов Владимир Иванович – член-корр. РАН, д-р мед. наук, профессор, руководитель отделения радионуклидной диагностики, НИИ онкологии, Томский НИМЦ

634050, г. Томск, Московский тракт, 2; 634050, г. Томск, 634050, пр. Ленина, 30; 

634009, г. Томск, пер. Кооперативный, 5

 

30, Lenina Av., Tomsk, 634050; 5, Kooperativny Str., Tomsk, 634009

 

chernov@tnimc.ruСибирский государственный медицинский университет; Национальный исследовательский Томский политехнический университетРоссияSiberian State Medical University; National Research Tomsk Polytechnic UniversityRussian FederationНациональный исследовательский Томский политехнический университетРоссияNational Research Tomsk Polytechnic UniversityRussian FederationНациональный исследовательский Томский политехнический университет; Институт биоорганической химии (ИБХ) им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наукРоссияNational Research Tomsk Polytechnic University; Shemyakin – Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Russian Academy of SciencesRussian FederationНациональный исследовательский Томский политехнический университет; Научно-исследовательский институт (НИИ) онкологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наукРоссияNational Research Tomsk Polytechnic University; Cancer Research Institute, Tomsk National Research Medical Center (NRMC), Russian Academy of ScienceRussian Federation2024061020242331624Copyright © Варвашеня Р.Н., Прач А.А., Плотников Е.B., Деев С.М., Белоусов М.В., Ларькина М.С., Чернов В.И., 20242024Варвашеня Р.Н., Прач А.А., Плотников Е.B., Деев С.М., Белоусов М.В., Ларькина М.С., Чернов В.И.Varvashenya R.N., Prach A.A., Plotnikov E.V., Deev S.M., Belousov M.V., Larkina M.S., Chernov V.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://bulletin.ssmu.ru/jour/article/view/5733

Цель – изучить in vitro и in vivo функциональную пригодность лиофилизата таргетных каркасных белков с анкириновыми повторами DARPin G3-(GGGS)3Cys, меченых 99mTc, для радионуклидной визуализации гиперэкспрессии HER2/neu в злокачественных опухолях.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для наработки таргетного белка использовали модифицированную генетическую конструкцию с последовательностью, кодирующей белок DARPin G3-(GGGS)3Cys. Для получения экспериментального препарата использовали лиофилизат, содержащий DARPin G3-(GGGS)3Cys со вспомогательными веществами, и раствор натрия пертехнетата, 99mТс (500 МБк) при инкубации 60 °С, 30 мин. Анализ радиохимической чистоты (РХЧ) 99mTс-G3-(GGGS)3Cys проводили тонкослойной радиохроматографией. Для оценки специфичности in vitro использовали клеточные линии: SKOV-3 > BT-474 > DU-145. Константу диссоциации определяли с помощью анализа насыщения на SKOV-3 в диапазоне концентраций белка от 0,2 до 40 нМ. Для оценки таргетных свойств и биораспределения использовали мышей линии Nu/j, несущих ксенотрансплантаты SKOV-3 (HER2/neu позитивные) и ксенотрансплантаты Ramos (HER2/neu негативные).

Результаты

Результаты. Получен радиокомплекс на основе 99mTс и лиофилизата таргетных белков DARPin G3(GGGS)3Cys  с  РХЧ  более  96%.  Связывание  99mTс-G3-(GGGS)3Cys  с  клетками  является  специфичным c KD  3,9 ± 0,5 нМ и пропорционально уровню экспрессии HER2/neu в клетках. Поглощение 99mTс-G3-(GGGS)3Cys в ксенотрансплантатах SKOV-3 было значимо выше, чем в ксенотрансплантатах Ramos. 99mTсG3-(GGGS)3Cys продемонстрировал быстрое выведение из крови, почечный клиренс, низкие уровни активности в слюнных железах и желудке. Уровень накопления активности в печени составил около 5–7 %ВД/г. Кроме того, 99mTс-G3-(GGGS)3Cys имел очень низкое поглощение в легких, мышцах, тонком кишечнике и костях.

Заключение

Заключение. Лиофилизат таргетных каркасных белков DARPin G3-(GGGS)3Cys, меченый 99mTc, функционально пригоден для визуализации гиперэкспрессии HER2/neu в опухолях, поскольку специфически связывается с рецептором, стабилен in vivo и имеет благоприятное биораспределение в органах и тканях. Радиокомплекс 99mTс-G3-(GGGS)3Cys получен по простой процедуре с высокой радиохимической чистотой.

Aim. To study in vitro and in vivo the functional suitability of 99mTc-labeled lyophilized formulation containing designed ankyrin repeat protein (DARPin) G3-(GGGS)3Cys for radionuclide imaging of HER2/neu overexpression in malignant tumors.Materials and methods. To create a targeted protein, a modified genetic construct with the sequence encoding DARPin G3-(GGGS)3Cys was used. To generate the experimental probe, we used a lyophilized formulation containing DARPin G3-(GGGS)3Cys with auxiliary substances and 99mTc sodium pertechnetate (500 MBq) incubated at 60 °C for 30 min. Radiochemical purity of 99mTc-G3-(GGGS)3Cys was analyzed by thin-layer radiochromatography. SKOV-3, BT-474, and DU-145 cell lines were used to test binding specificity in vitro. The dissociation constant was determined via a saturation binding assay on SKOV-3 cells with a range of protein concentrations from 0.2 to 40 nM. Nu/j mice bearing HER2-positive SKOV-3 xenografts and HER2-negative Ramos xenografts were used to evaluate the targeting properties and biodistribution.Results. A radiocomplex based on 99mTc and a lyophilized formulation with DARPin G3-(GGGS)3Cys was obtained with the radiochemical purity of more than 96%. Binding of 99mTc-G3-(GGGS)3Cys to the cells was specific (KD 3.9 ± 0.5 nM) and proportional to the level of HER2/neu expression in the cells. The uptake of 99mTc-G3-(GGGS)3Cys in SKOV-3 xenografts was significantly higher than in Ramos xenografts. 99mTc-G3-(GGGS)3Cys demonstrated rapid blood and renal clearance and had low activity in the salivary glands and stomach. Liver uptake was about 5–7%ID/g. In addition, 99mTc-G3-(GGGS)3Cys exhibited very low uptakes in the lungs, muscles, small intestine, and bones.Conclusion. The 99mTc-labeled lyophilized formulation with DARPin G3-(GGGS)3Cys is functionally suitable for imaging HER2/neu overexpression in tumors, as it binds specifically to the receptor, is stable in vivo, and has favorable biodistribution in organs and tissues. The radiocomplex based on 99mTc-G3-(GGGS)3Cys was obtained by a simple method with high radiochemical purity.

злокачественные опухолиHer2/neuрадионуклидная диагностикаDARPin G3оксотехнецийлиофилизатmalignant tumorsHer2/neuradionuclide diagnosisDARPin G3oxotechnetiumlyophilized formulationReferencesRoskoski R. Jr. Small molecule inhibitors targeting the EGFR/ErbB family of protein-tyrosine kinases in human cancers. Pharmacol. Res. 2019;139:395–411. DOI: 10.1016/j. phrs.2018.11.014.Roskoski R. Jr. Small molecule inhibitors targeting the EGFR/ErbB family of protein-tyrosine kinases in human cancers. Pharmacol. Res. 2019;139:395–411. DOI: 10.1016/j. phrs.2018.11.014.Swain S.M., Shastry M., Hamilton E. Targeting HER2-positive breast cancer: advances and future directions. Nat. Rev. Drug Discov. 2023;22(2):101–126. DOI: 10.1038/s41573-02200579-0.Swain S.M., Shastry M., Hamilton E. Targeting HER2-positive breast cancer: advances and future directions. Nat. Rev. Drug Discov. 2023;22(2):101–126. DOI: 10.1038/s41573-02200579-0.Giordano S.H., Franzoi M.A.B., Temin S., Anders C.K., Chandarlapaty S., Crews J.R. et al. Systemic therapy for advanced human epidermal growth factor receptor 2-positive breast cancer: ASCO guideline update. J. Clin. Oncol. 2022;40(23):2612–2635. DOI: 10.1200/jco.22.00519.Giordano S.H., Franzoi M.A.B., Temin S., Anders C.K., Chandarlapaty S., Crews J.R. et al. Systemic therapy for advanced human epidermal growth factor receptor 2-positive breast cancer: ASCO guideline update. J. Clin. Oncol. 2022;40(23):2612–2635. DOI: 10.1200/jco.22.00519.Al-Batran S.E., Moorahrend E., Maintz C., Goetze T.O., Hempel D., Thuss-Patience P. et al. Clinical practice observation of trastuzumab in patients with human epidermal growth receptor 2-positive metastatic adenocarcinoma of the stomach or gastroesophageal junction. Oncologist. 2020;25(8):e1181– 118e7. DOI: 10.1634/theoncologist.2020-0109.Al-Batran S.E., Moorahrend E., Maintz C., Goetze T.O., Hempel D., Thuss-Patience P. et al. Clinical practice observation of trastuzumab in patients with human epidermal growth receptor 2-positive metastatic adenocarcinoma of the stomach or gastroesophageal junction. Oncologist. 2020;25(8):e1181– 118e7. DOI: 10.1634/theoncologist.2020-0109.Swain S.M., Miles D., Kim S.B., Im Y.H., Im S.A., Semiglazov V. et al. Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer (CLEOPATRA): endof-study results from a double-blind, randomised, placebo-controlled, phase 3 study. Lancet Oncol. 2020;21(4):519–530. DOI: 10.1016/s1470-2045(19)30863-0.Swain S.M., Miles D., Kim S.B., Im Y.H., Im S.A., Semiglazov V. et al. Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer (CLEOPATRA): endof-study results from a double-blind, randomised, placebo-controlled, phase 3 study. Lancet Oncol. 2020;21(4):519–530. DOI: 10.1016/s1470-2045(19)30863-0.Lorusso D., Hilpert F., González Martin A., Rau J., Ottevanger P., Greimel E. et al. Patient-reported outcomes and final overall survival results from the randomized phase 3 PENELOPE trial evaluating pertuzumab in low tumor human epidermal growth factor receptor 3 (HER3) mRNA-expressing platinum-resistant ovarian cancer. Int. J. Gynecol. Cancer. 2019;29(7):1141–1147. DOI: 10.1136/ijgc-2019-000370.Lorusso D., Hilpert F., González Martin A., Rau J., Ottevanger P., Greimel E. et al. Patient-reported outcomes and final overall survival results from the randomized phase 3 PENELOPE trial evaluating pertuzumab in low tumor human epidermal growth factor receptor 3 (HER3) mRNA-expressing platinum-resistant ovarian cancer. Int. J. Gynecol. Cancer. 2019;29(7):1141–1147. DOI: 10.1136/ijgc-2019-000370.Li B.T., Smit E.F., Goto Y., Nakagawa K., Udagawa H., Mazières J. et al. Trastuzumab deruxtecan in HER2-mutant non-small-cell lung cancer. N. Engl. J. Med. 2022;386(3):241– 251. DOI: 10.1056/NEJMoa2112431.Li B.T., Smit E.F., Goto Y., Nakagawa K., Udagawa H., Mazières J. et al. Trastuzumab deruxtecan in HER2-mutant non-small-cell lung cancer. N. Engl. J. Med. 2022;386(3):241– 251. DOI: 10.1056/NEJMoa2112431.Tymon-Rosario J., Siegel E.R., Bellone S., Harold J., Adjei N., Zeybek B. et al. Trastuzumab tolerability in the treatment of advanced (stage III-IV) or recurrent uterine serous carcinomas that overexpress HER2/neu. Gynecol. Oncol. 2021;163(1):93– 99. DOI: 10.1016/j.ygyno.2021.07.033.Tymon-Rosario J., Siegel E.R., Bellone S., Harold J., Adjei N., Zeybek B. et al. Trastuzumab tolerability in the treatment of advanced (stage III-IV) or recurrent uterine serous carcinomas that overexpress HER2/neu. Gynecol. Oncol. 2021;163(1):93– 99. DOI: 10.1016/j.ygyno.2021.07.033.Modi S., Jacot W., Yamashita T., Sohn J., Vidal M., Tokunaga E. et al. Trastuzumab deruxtecan in previously treated HER2-Low advanced breast cancer. N. Engl. J. Med. 2022;387(1):9–20. DOI: 10.1056/NEJMoa2203690.Modi S., Jacot W., Yamashita T., Sohn J., Vidal M., Tokunaga E. et al. Trastuzumab deruxtecan in previously treated HER2-Low advanced breast cancer. N. Engl. J. Med. 2022;387(1):9–20. DOI: 10.1056/NEJMoa2203690.Брагина О.Д., Деев С.М., Гарбуков Е.Ю., Гольдберг В.Е., Чернов В.И., Толмачев В.М. Прямое сравнение диагностической эффективности радиофармацевтических препаратов на основе альтернативных каркасных протеинов [99mTc] Tc-ADAPT6 и [99mTc] Tc-(HE) 3-G3 у больных HER2-позитивным раком молочной железы. Бюллетень сибирской медицины. 2023;22(3):6–13.Брагина О.Д., Деев С.М., Гарбуков Е.Ю., Гольдберг В.Е., Чернов В.И., Толмачев В.М. Прямое сравнение диагностической эффективности радиофармацевтических препаратов на основе альтернативных каркасных протеинов [99mTc] Tc-ADAPT6 и [99mTc] Tc-(HE) 3-G3 у больных HER2-позитивным раком молочной железы. Бюллетень сибирской медицины. 2023;22(3):6–13.Sörensen J., Velikyan I., Sandberg D., Wennborg A., Feldwisch J., Tolmachev V. et al. Measuring HER2-receptor expression in metastatic breast cancer using [68Ga]ABY-025 affibody PET/CT. Theranostics. 2016;6(2):262–271. DOI: 10.7150/thno.13502.Sörensen J., Velikyan I., Sandberg D., Wennborg A., Feldwisch J., Tolmachev V. et al. Measuring HER2-receptor expression in metastatic breast cancer using [68Ga]ABY-025 affibody PET/CT. Theranostics. 2016;6(2):262–271. DOI: 10.7150/thno.13502.Deyev S., Vorobyeva A., Schulga A., Proshkina G., Güler R., Löfblom J. et al. Comparative evaluation of two DARPin variants: effect of affinity, size, and label on tumor targeting properties. Mol. Pharm. 2019;16(3):995–1008. DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.8b00922.Deyev S., Vorobyeva A., Schulga A., Proshkina G., Güler R., Löfblom J. et al. Comparative evaluation of two DARPin variants: effect of affinity, size, and label on tumor targeting properties. Mol. Pharm. 2019;16(3):995–1008. DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.8b00922.Bragina O., Chernov V., Larkina M., Rybina A., Zelchan R., Garbukov E. et al. Phase I clinical evaluation of (99m)Tc-labeled affibody molecule for imaging HER2 expression in breast cancer. Theranostics. 2023;13(14):4858–4871. DOI: 10.7150/thno.86770.Bragina O., Chernov V., Larkina M., Rybina A., Zelchan R., Garbukov E. et al. Phase I clinical evaluation of (99m)Tc-labeled affibody molecule for imaging HER2 expression in breast cancer. Theranostics. 2023;13(14):4858–4871. DOI: 10.7150/thno.86770.Plückthun A. Designed ankyrin repeat proteins (DARPins): binding proteins for research, diagnostics, and therapy. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2015;55:489–511. DOI: 10.1146/annurev-pharmtox-010611-134654.Plückthun A. Designed ankyrin repeat proteins (DARPins): binding proteins for research, diagnostics, and therapy. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2015;55:489–511. DOI: 10.1146/annurev-pharmtox-010611-134654.Goldstein R., Sosabowski J., Livanos M., Leyton J., Vigor K., Bhavsar G. et al. Development of the designed ankyrin repeat protein (DARPin) G3 for HER2 molecular imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2015;42(2):288–301. DOI: 10.1007/s00259-014-2940-2.Goldstein R., Sosabowski J., Livanos M., Leyton J., Vigor K., Bhavsar G. et al. Development of the designed ankyrin repeat protein (DARPin) G3 for HER2 molecular imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2015;42(2):288–301. DOI: 10.1007/s00259-014-2940-2.Vorobyeva A., Schulga A., Konovalova E., Güler R., Löfblom J., Sandström M. et al. Optimal composition and position of histidine-containing tags improves biodistribution of (99m)Tc-labeled DARPin G3. Sci. Rep. 2019;9(1):9405. DOI: 10.1038/s41598-019-45795-8.Vorobyeva A., Schulga A., Konovalova E., Güler R., Löfblom J., Sandström M. et al. Optimal composition and position of histidine-containing tags improves biodistribution of (99m)Tc-labeled DARPin G3. Sci. Rep. 2019;9(1):9405. DOI: 10.1038/s41598-019-45795-8.Tolmachev V., Orlova A., Sörensen J. The emerging role of radionuclide molecular imaging of HER2 expression in breast cancer. Semin. Cancer Biol. 2021;72:185–197. DOI: 10.1016/j.semcancer.2020.10.005.Tolmachev V., Orlova A., Sörensen J. The emerging role of radionuclide molecular imaging of HER2 expression in breast cancer. Semin. Cancer Biol. 2021;72:185–197. DOI: 10.1016/j.semcancer.2020.10.005.Bragina O., Chernov V., Schulga A., Konovalova E., Garbukov E., Vorobyeva A. et al. Phase I trial of (99m)Tc-(HE) (3)-G3, a DARPin-based probe for imaging of HER2 expression in breast cancer. J. Nucl. Med. 2022;63(4):528–535. DOI: 10.2967/jnumed.121.262542.Bragina O., Chernov V., Schulga A., Konovalova E., Garbukov E., Vorobyeva A. et al. Phase I trial of (99m)Tc-(HE) (3)-G3, a DARPin-based probe for imaging of HER2 expression in breast cancer. J. Nucl. Med. 2022;63(4):528–535. DOI: 10.2967/jnumed.121.262542.Larkina M., Plotnikov E., Bezverkhniaia E., Shabanova Y., Tretyakova M., Yuldasheva F. et al. Comparative preclinical evaluation of peptide-based chelators for the labeling of DARPin G3 with (99m)Tc for radionuclide imaging of HER2 expression in cancer. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(21). DOI: 10.3390/ijms232113443.Larkina M., Plotnikov E., Bezverkhniaia E., Shabanova Y., Tretyakova M., Yuldasheva F. et al. Comparative preclinical evaluation of peptide-based chelators for the labeling of DARPin G3 with (99m)Tc for radionuclide imaging of HER2 expression in cancer. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(21). DOI: 10.3390/ijms232113443.Malakhov M.P., Mattern M.R., Malakhova O.A., Drinker M., Weeks S.D., Butt T.R. SUMO fusions and SUMO-specific protease for efficient expression and purification of proteins. J. Struct Funct Genomics. 2004;5(1-2):75–86. DOI: 10.1023/b:Jsfg.0000029237.70316.52.Malakhov M.P., Mattern M.R., Malakhova O.A., Drinker M., Weeks S.D., Butt T.R. SUMO fusions and SUMO-specific protease for efficient expression and purification of proteins. J. Struct Funct Genomics. 2004;5(1-2):75–86. DOI: 10.1023/b:Jsfg.0000029237.70316.52.Cleland J.L., Jones A.J. Stable formulations of recombinant human growth hormone and interferon-gamma for microencapsulation in biodegradable microspheres. Pharm. Res. 1996;13(10):1464–1475. DOI: 10.1023/a:1016063109373.Cleland J.L., Jones A.J. Stable formulations of recombinant human growth hormone and interferon-gamma for microencapsulation in biodegradable microspheres. Pharm. Res. 1996;13(10):1464–1475. DOI: 10.1023/a:1016063109373.Riihimäki M., Thomsen H., Sundquist K., Sundquist J., Hemminki K. Clinical landscape of cancer metastases. Cancer Med. 2018;7(11):5534–5542. DOI: 10.1002/cam4.1697.Riihimäki M., Thomsen H., Sundquist K., Sundquist J., Hemminki K. Clinical landscape of cancer metastases. Cancer Med. 2018;7(11):5534–5542. DOI: 10.1002/cam4.1697.Bragina O., Chernov V., Schulga A., Konovalova E., Hober S., Deyev S. et al. direct intra-patient comparison of scaffold protein-based tracers, [(99m)Tc]Tc-ADAPT6 and [(99m) Tc]Tc-(HE)(3)-G3, for imaging of HER2-positive breast cancer. Cancers (Basel). 2023;15(12). DOI: 10.3390/cancers15123149.Bragina O., Chernov V., Schulga A., Konovalova E., Hober S., Deyev S. et al. direct intra-patient comparison of scaffold protein-based tracers, [(99m)Tc]Tc-ADAPT6 and [(99m) Tc]Tc-(HE)(3)-G3, for imaging of HER2-positive breast cancer. Cancers (Basel). 2023;15(12). DOI: 10.3390/cancers15123149.Bragina O., von Witting E., Garousi J., Zelchan R., Sandström M., Orlova A. et al. Phase I study of (99m)Tc-ADAPT6, a scaffold protein-based probe for visualization of HER2 expression in breast cancer. J. Nucl. Med. 2021;62(4):493–499. DOI: 10.2967/jnumed.120.248799.Bragina O., von Witting E., Garousi J., Zelchan R., Sandström M., Orlova A. et al. Phase I study of (99m)Tc-ADAPT6, a scaffold protein-based probe for visualization of HER2 expression in breast cancer. J. Nucl. Med. 2021;62(4):493–499. DOI: 10.2967/jnumed.120.248799.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.