ssmuБюллетень сибирской медициныBulletin of Siberian Medicine1682-03631819-3684Siberian State Medical University, the Ministry of Healthcare of the Russian Federation10.20538/1682-0363-2026-1-86-95ssmu-6402Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL PAPERSОценка риска вертикального переноса аденоассоциированного вектора химерного серотипа PHP.eB в ооциты мышейRisk assessment of germline transmission of adeno-associated virul vector of chimeric serotype PHP.eB into mouse oocyteshttps://orcid.org/0009-0001-2417-6620МаликоваА. Д.MalikovaA. D.

Маликова Александра Дмитриевна – мл. науч. сотрудник, лаборатория генетической и репродуктивной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

malikova_ad@academpharm.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7673-8672ЖанатаевА. К.ZhanataevA. K.

Жанатаев Алий Курманович – канд. биол. наук, вед. науч. сотрудник, зав. лабораторией генетической и репродуктивной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

zhanataev_ak@academpharm.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2063-2449ЕсмагамбетовИ. Б.EsmagambetovI. B.

Есмагамбетов Ильяс Булатович – канд. биол. наук, вед. науч. сотрудник, зав. лабораторией стромальной регуляции иммунитета

Россия, 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18

18 Gamaleya St., 123098 Moscow, Russian Federation

iesmagambetovib@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7542-5658АнисинаЕ. А.AnisinaE. A.

Анисина Елена Александровна – ст. науч. сотрудник, лаборатория генетической и репродуктивной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

anisina_ea@academpharm.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2026-5260ПлигинаК. Л.AnisinaK. L.

Плигина Кира Львовна – канд. биол. наук, ст. науч. сотрудник, лаборатория генетической и репродуктивной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

pligina_kl@academpharm.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5366-4917ЧайкаЗ. В.ChaikaZ. B.

Чайка Злата Владимировна – научный сотрудник, лаборатория генетической и репродуктивной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

chajka_zv@academpharm.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2687-5185РябоваЕ. И.RyabovaE. I.

Рябова Екатерина Игоревна – мл. науч. сотрудник, лаборатория иммунобиотехнологии

Россия, 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18 

 18 Gamaleya St., 123098 Moscow, Russian Federation 

ryabovaei96@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-0017-7784ДовгийМ. А.DovgiyM. A.

Довгий Михаил Андреевич – мл. науч. сотрудник, лаборатория иммунобиотехнологии

Россия, 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18

 18 Gamaleya St., 123098 Moscow, Russian Federation 

imhail@yandex.ruhttps://orcid.org/0009-0009-4483-2697ХоссаинР. М.HossainR. M.

Хоссаин Роза Махбубовна – мл. науч. сотрудник, лаборатория стромальной регуляции иммунитета

Россия, 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18

 18 Gamaleya St., 123098 Moscow, Russian Federation 

xossain2013@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-0912-7684ДурневА. Д.DurnevA. D.

Дурнев Андрей Дмитриевич – д-р мед. наук, профессор, академик РАН, руководитель отдела лекарственной токсикологии

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

durnev_ad@academpharm.ruhttps://orcid.org/0009-0004-3584-3742ДорофеевВ. Л.DorofeevV. L.

Дорофеев Владимир Львович – д-р фарм. наук, профессор, и.о. генерального директора

Россия, 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

 8 Baltiyskaya St., 125315 Moscow, Russian Federation 

dorofeev_vl@academpharm.ruФедеральный исследовательский центр (ФИЦ) оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологийРоссияFederal State Budgetary Research Institution Federal Research Center for Innovator and Emerging Biomedical and Pharmaceutical TechnologiesRussian FederationНациональный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии (НИЦЭМ) им. почетного академика Н.Ф. ГамалеиРоссияFederal State Budgetary Institution Gamaleya National Center for Epidemiology and MicrobiologyRussian Federation2026130420262518695Copyright © Маликова А.Д., Жанатаев А.К., Есмагамбетов И.Б., Анисина Е.А., Плигина К.Л., Чайка З.В., Рябова Е.И., Довгий М.А., Хоссаин Р.М., Дурнев А.Д., Дорофеев В.Л., 20262026Маликова А.Д., Жанатаев А.К., Есмагамбетов И.Б., Анисина Е.А., Плигина К.Л., Чайка З.В., Рябова Е.И., Довгий М.А., Хоссаин Р.М., Дурнев А.Д., Дорофеев В.Л.Malikova A.D., Zhanataev A.K., Esmagambetov I.B., Anisina E.A., Anisina K.L., Chaika Z.B., Ryabova E.I., Dovgiy M.A., Hossain R.M., Durnev A.D., Dorofeev V.L.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://bulletin.ssmu.ru/jour/article/view/6402

Цель. Оценить риск вертикального переноса аденоассоциированного вирусного вектора химерного серотипа PHP.eB в половые клетки самок мышей на основе разработки оригинального способа получения ооцитов мышей, неконтаминированных соматическими клетками и свободными векторными частицами.Материалы и методы. Исследуемый вектор вводили внутривенно самкам аутбредных мышей CD-1 в дозе 5 × 1010 векторных геномов на мышь. Использовали оригинальную методологию, включающую гормональную суперовуляцию экспонированных животных, выделение ооцитов, их очистку от контаминирующих соматических клеток и прямую количественную полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на лизированных ооцитах. Содержание векторной ДНК в ткани головного мозга, яичников и в ооцитах оценивали на 1, 3, 7, 14, 30 и 90-е сут после введения вектора.Результаты. С использованием разработанного подхода исследована способность к вертикальному переносу в ооциты мышей аденоассоциированного вирусного вектора химерного серотипа PHP.eB. Установлено, что несмотря на персистенцию в ткани головного мозга и яичников до 3 мес, векторная ДНК не выявляется в ооцитах ни на одном из сроков после введения вектора.Заключение. Полученные данные демонстрируют отсутствие вертикального переноса в ооциты мышей исследуемой генной конструкции. Выявление аденоассоциированного вектора в яичниках при его необнаружении в ооцитах подтверждает эффективность разработанной методики получения ооцитов мышей, неконтаминированных соматическими клетками.

Aim. To assess the risk of germline transmission of an adeno-associated virul vector of the chimeric serotype PHP. eB into the germ cells of female mice based on the development of an original method for obtaining mouse oocytes devoid of somatic cells and free vector particles.Materials and methods. The vector under study was administered intravenously to female outbred CD-1 mice at a dose of 5 × 10¹⁰ vector genomes/mouse using an original technique which included hormonal superovulation of exposed animals, oocyte isolation, their purification from contaminating somatic cells, and direct quantitative PCR on lysed oocytes. The vector DNA content in the brain tissue, ovaries, and oocytes was assessed on days 1, 3, 7, 14, 30, and 90 after vector administration.Results. Using the developed technique, we examined the ability of the adeno-associated virus vector of the chimeric serotype PHP.eB to undergo germline transmission into mouse oocytes. It was established that, despite persistence in brain and ovarian tissue for up to 3 months, vector DNA was not detected in oocytes at any time after vector administration.Conclusion. The obtained data demonstrate the absence of germline transmission of the studied genetic construct into mouse oocytes. The detection of the adeno-associated vector in the ovaries, despite its absence in oocytes, confirms the effectiveness of the developed technique for obtaining mouse oocytes uncontaminated with somatic cells.

аденоассоциированный векторхимерный серотип PHP.eBвертикальный переносооцитымышипрямая ПЦРadeno-associated vectorchimeric serotype PHP.eBgermline transmissionoocytesmicedirect PCRИсследование выполнено при поддержке Министерства науки и высшего образования в рамках финансирования по теме «Технологии сбережения здоровья на основе методологии доклинических исследований безопасности лекарственных средств» (№ FGFG2025-0003).This study was supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation as part of the research project “Health Preservation Technologies Based on the Methodology of Preclinical Studies of Drug Safety” (No. FGFG 2025-0003).ReferencesArabi F., Mansouri V., Ahmadbeigi N. Gene therapy clinical trials, where do we go? An overview. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2022;153:113324. DOI: 10.1016/j.biopha.2022.113324.Arabi F., Mansouri V., Ahmadbeigi N. Gene therapy clinical trials, where do we go? An overview. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2022;153:113324. DOI: 10.1016/j.biopha.2022.113324.Макаревич П.И. Три десятилетия развития генной терапии: вехи и перспективы. Регенерация органов и тканей. 2023;1(1):16-24. DOI: 10.60043/2949-5938-2023-1-16-24.Макаревич П.И. Три десятилетия развития генной терапии: вехи и перспективы. Регенерация органов и тканей. 2023;1(1):16-24. DOI: 10.60043/2949-5938-2023-1-16-24.Bittlinger M., Hoffmann D., Sierawska A.K., Mertz M., Schambach A., Strech D. Risk assessment in gene therapy and somatic genome-editing: An expert interview study. Gene and Genome Editing. 2022;3-4:100011. DOI: 10.1016/j.ggedit.2022.100011.Bittlinger M., Hoffmann D., Sierawska A.K., Mertz M., Schambach A., Strech D. Risk assessment in gene therapy and somatic genome-editing: An expert interview study. Gene and Genome Editing. 2022;3-4:100011. DOI: 10.1016/j.ggedit.2022.100011.Астапова О.В., Берчатова А.А. Генотерапевтические препараты: аспекты доклинического изучения безопасности. Безопасность и риск фармакотерапии. 2023;11(1):73-96. DOI: 10.30895/2312-7821-2023-11-1-329.Астапова О.В., Берчатова А.А. Генотерапевтические препараты: аспекты доклинического изучения безопасности. Безопасность и риск фармакотерапии. 2023;11(1):73-96. DOI: 10.30895/2312-7821-2023-11-1-329.Moffit J.S., Blanset D.L., Lynch J.L., MacLachlan T.K., Meyer K.E., Whiteley L.O. et al. Regulatory consideration for the nonclinical safety assessment of gene therapies. Hum. Gene Ther. 2022;33(21-22):1126-1141. DOI: 10.1089/hum.2022.090.Moffit J.S., Blanset D.L., Lynch J.L., MacLachlan T.K., Meyer K.E., Whiteley L.O. et al. Regulatory consideration for the nonclinical safety assessment of gene therapies. Hum. Gene Ther. 2022;33(21-22):1126-1141. DOI: 10.1089/hum.2022.090.ICH guideline S12 on nonclinical biodistribution considerations for gene therapy products (EMA/CHMP/ICH/318372/2021).ICH guideline S12 on nonclinical biodistribution considerations for gene therapy products (EMA/CHMP/ICH/318372/2021).Quality, preclinical and clinical aspects of gene therapy medicinal products - Scientific guideline. (EMA/CAT/80183/2014.EMA, 2018).Quality, preclinical and clinical aspects of gene therapy medicinal products - Scientific guideline. (EMA/CAT/80183/2014.EMA, 2018).ICH Considerations. General principles to address the risk of inadvertent germline integration of gene therapy vectors (CHMP/ICH/469991/2006).ICH Considerations. General principles to address the risk of inadvertent germline integration of gene therapy vectors (CHMP/ICH/469991/2006).Non-clinical testing for inadvertent germline transmission of gene transfer vectors - Scientific guideline. (EMEA/273974/2005. EMA, 2006).Non-clinical testing for inadvertent germline transmission of gene transfer vectors - Scientific guideline. (EMEA/273974/2005. EMA, 2006).Chan K.Y., Jang M.J., Yoo B.B., Ravi N., Wu W.L., Sanchez-Guardado L. et al. Engineered AAVs for efficient noninvasive gene delivery to the central and peripheral nervous systems. Nat. Neurosci. 2017;20(8):1172-1179. DOI: 10.1038/nn.4593.Chan K.Y., Jang M.J., Yoo B.B., Ravi N., Wu W.L., Sanchez-Guardado L. et al. Engineered AAVs for efficient noninvasive gene delivery to the central and peripheral nervous systems. Nat. Neurosci. 2017;20(8):1172-1179. DOI: 10.1038/nn.4593.Esmagambetov I.B., Ryabova E.I., Derkaev A.A., Shcheblyakov D.V., Dolzhikova I.V., Favorskaya I.A. et al. rAAV expressing recombinant antibody for emergency prevention and long-term prophylaxis of COVID-19. Front. Immunol. 2023;14. DOI: 10.3389/fimmu.2023.1129245.Esmagambetov I.B., Ryabova E.I., Derkaev A.A., Shcheblyakov D.V., Dolzhikova I.V., Favorskaya I.A. et al. rAAV expressing recombinant antibody for emergency prevention and long-term prophylaxis of COVID-19. Front. Immunol. 2023;14. DOI: 10.3389/fimmu.2023.1129245.Derkaev A.A., Ryabova E.I., Esmagambetov I.B., Shcheblyakov D.V., Godakova S.A., Vinogradova I.D. et al. rAAV expressing recombinant neutralizing antibody for the botulinum neurotoxin type A prophylaxis. Front. Microbiol. 2022;13:960937. DOI: 10.3389/fmicb.2022.960937.Derkaev A.A., Ryabova E.I., Esmagambetov I.B., Shcheblyakov D.V., Godakova S.A., Vinogradova I.D. et al. rAAV expressing recombinant neutralizing antibody for the botulinum neurotoxin type A prophylaxis. Front. Microbiol. 2022;13:960937. DOI: 10.3389/fmicb.2022.960937.Рябова Е.И., Деркаев А.А., Есмагамбетов И.Б., Щебляков Д.В., Довгий М.А., Бырихина Д.В. и др. Сравнение различных технологий получения рекомбинантного аденоассоциированного вируса в лабораторном масштабе. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2021;21(4):266-278. DOI: 10.30895/2221-996X-2021-21-4-266-278.Рябова Е.И., Деркаев А.А., Есмагамбетов И.Б., Щебляков Д.В., Довгий М.А., Бырихина Д.В. и др. Сравнение различных технологий получения рекомбинантного аденоассоциированного вируса в лабораторном масштабе. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2021;21(4):266-278. DOI: 10.30895/2221-996X-2021-21-4-266-278.Плигина К.Л., Жанатаев А.К., Чайка З.В., Дурнев А.Д. Методика цитогенетического анализа ооцитов мышей. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2013;156(7):128–132. DOI: 10.1007/s10517-013-2292-0.Плигина К.Л., Жанатаев А.К., Чайка З.В., Дурнев А.Д. Методика цитогенетического анализа ооцитов мышей. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2013;156(7):128–132. DOI: 10.1007/s10517-013-2292-0.Tsuchiya S., Sueoka K., Matsuda N., Tanigaki R., Asada H., Hashiba T. et al. The “spanning protocol”: a new DNA extraction method for efficient single-cell genetic diagnosis. J. Assist. Reprod. Genet. 2005;22(11–12):407–414. DOI: 10.1007/s10815-005-7482-x.Tsuchiya S., Sueoka K., Matsuda N., Tanigaki R., Asada H., Hashiba T. et al. The “spanning protocol”: a new DNA extraction method for efficient single-cell genetic diagnosis. J. Assist. Reprod. Genet. 2005;22(11–12):407–414. DOI: 10.1007/s10815-005-7482-x.Ma H., Bell K.N., Loker R.N. qPCR and qRT-PCR analysis: Regulatory points to consider when conducting biodistribution and vector shedding studies. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2021;20:152–168. DOI: 10.1016/j.omtm.2020.11.007.Ma H., Bell K.N., Loker R.N. qPCR and qRT-PCR analysis: Regulatory points to consider when conducting biodistribution and vector shedding studies. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2021;20:152–168. DOI: 10.1016/j.omtm.2020.11.007.Martín-Coello J., Gonzalez R., Crespo C., Gomendio M., Roldan E.R.S. Superovulation and in vitro oocyte maturation in three species of mice (Mus musculus, Mus spretus and Mus spicilegus). Theriogenology. 2008;70(6):1004–1013. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2008.06.002.Martín-Coello J., Gonzalez R., Crespo C., Gomendio M., Roldan E.R.S. Superovulation and in vitro oocyte maturation in three species of mice (Mus musculus, Mus spretus and Mus spicilegus). Theriogenology. 2008;70(6):1004–1013. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2008.06.002.Okada H., Hirose Y., Manonmani P., Ito M., Sankai T. Zona-float method for separating mouse eggs from other cells. Exp. Anim. 2004;53(4):355–359. DOI: 10.1538/expanim.53.355.Okada H., Hirose Y., Manonmani P., Ito M., Sankai T. Zona-float method for separating mouse eggs from other cells. Exp. Anim. 2004;53(4):355–359. DOI: 10.1538/expanim.53.355.Mahrous E., Yang Q., Clarke H.J. Regulation of mitochondrial DNA accumulation during oocyte growth and meiotic maturation in the mouse. Reproduction. 2012;144(2):177–185. DOI: 10.1530/REP-12-0113.Mahrous E., Yang Q., Clarke H.J. Regulation of mitochondrial DNA accumulation during oocyte growth and meiotic maturation in the mouse. Reproduction. 2012;144(2):177–185. DOI: 10.1530/REP-12-0113.Forootan A., Sjöback R., Björkman J., Sjögreen B., Linz L., Kubista M. Methods to determine limit of detection and limit of quantification in quantitative real-time PCR (qPCR). Biomol. Detect. Quantif. 2017;12:1–6. DOI: 10.1016/j.bdq.2017.04.001.Forootan A., Sjöback R., Björkman J., Sjögreen B., Linz L., Kubista M. Methods to determine limit of detection and limit of quantification in quantitative real-time PCR (qPCR). Biomol. Detect. Quantif. 2017;12:1–6. DOI: 10.1016/j.bdq.2017.04.001.Andrade G.M., del Collado M., Meirelles F.V., da Silveira J.C., Perecin F. Intrafollicular barriers and cellular interactions during ovarian follicle development. Anim. Reprod. 16(3):485–496. DOI: 10.21451/1984-3143-AR2019-0051.Andrade G.M., del Collado M., Meirelles F.V., da Silveira J.C., Perecin F. Intrafollicular barriers and cellular interactions during ovarian follicle development. Anim. Reprod. 16(3):485–496. DOI: 10.21451/1984-3143-AR2019-0051.Zhou H., Ohno N., Terada N., Saitoh S., Fujii Y., Ohno S. Involvement of follicular basement membrane and vascular endothelium in blood follicle barrier formation of mice revealed by “in vivo cryotechnique.” Reproduction. 2007;134(2):307–317. DOI: 10.1530/REP-07-0062.Zhou H., Ohno N., Terada N., Saitoh S., Fujii Y., Ohno S. Involvement of follicular basement membrane and vascular endothelium in blood follicle barrier formation of mice revealed by “in vivo cryotechnique.” Reproduction. 2007;134(2):307–317. DOI: 10.1530/REP-07-0062.Krivonogova A.S., Bruter A.V., Makutina V.A., Okulova Y.D., Ilchuk L.A., Kubekina M.V. et al. AAV infection of bovine embryos: Novel, simple and effective tool for genome editing. Theriogenology. 2022;193:77–86. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2022.09.007.Krivonogova A.S., Bruter A.V., Makutina V.A., Okulova Y.D., Ilchuk L.A., Kubekina M.V. et al. AAV infection of bovine embryos: Novel, simple and effective tool for genome editing. Theriogenology. 2022;193:77–86. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2022.09.007.Sato M., Sato-Yamamoto N., Wakita A., Haraguchi M., Shimonishi M., Okuno H. Direct Injection of recombinant AAV-containing solution into the oviductal lumen of pregnant mice caused in situ infection of both preimplantation embryos and oviductal epithelium. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(9):4897. DOI: 10.3390/ijms23094897.Sato M., Sato-Yamamoto N., Wakita A., Haraguchi M., Shimonishi M., Okuno H. Direct Injection of recombinant AAV-containing solution into the oviductal lumen of pregnant mice caused in situ infection of both preimplantation embryos and oviductal epithelium. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(9):4897. DOI: 10.3390/ijms23094897.Kanatsu-Shinohara M., Lee J., Miyazaki T., Morimoto H., Shinohara T. Adeno-associated-virus-mediated gene delivery to ovaries restores fertility in congenital infertile mice. Cell Rep. Med. 2022;3(5):100606. DOI: 10.1016/j.xcrm.2022.100606.Kanatsu-Shinohara M., Lee J., Miyazaki T., Morimoto H., Shinohara T. Adeno-associated-virus-mediated gene delivery to ovaries restores fertility in congenital infertile mice. Cell Rep. Med. 2022;3(5):100606. DOI: 10.1016/j.xcrm.2022.100606.Urbanelli L., Buratta S., Tancini B., Sagini K., Delo F., Porcellati S. et al. The role of extracellular vesicles in viral infection and transmission. Vaccines (Basel). 2019;7(3):102. DOI: 10.3390/vaccines7030102.Urbanelli L., Buratta S., Tancini B., Sagini K., Delo F., Porcellati S. et al. The role of extracellular vesicles in viral infection and transmission. Vaccines (Basel). 2019;7(3):102. DOI: 10.3390/vaccines7030102.Hu X.L., Zhou X.P., Qian Y.L., Wu G.Y., Ye Y.H., Zhu Y.M. The presence and expression of the hepatitis B virus in human oocytes and embryos. Hum. Reprod. 2011;26(7):1860–1867. DOI: 10.1093/humrep/der103.Hu X.L., Zhou X.P., Qian Y.L., Wu G.Y., Ye Y.H., Zhu Y.M. The presence and expression of the hepatitis B virus in human oocytes and embryos. Hum. Reprod. 2011;26(7):1860–1867. DOI: 10.1093/humrep/der103.Ajayi A.F., Akhigbe R.E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertil. Res. Pract. 2020;6:5. DOI: 10.1186/s40738-020-00074-3.Ajayi A.F., Akhigbe R.E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertil. Res. Pract. 2020;6:5. DOI: 10.1186/s40738-020-00074-3.Aizawa R., Ibayashi M., Mitsui J., Tsukamoto S. Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice. J. Reprod. Dev. 2024;70(1):18–24. DOI: 10.1262/jrd.2023-055.Aizawa R., Ibayashi M., Mitsui J., Tsukamoto S. Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice. J. Reprod. Dev. 2024;70(1):18–24. DOI: 10.1262/jrd.2023-055.Pupo A., Fernández A., Low S.H., François A., Suarez-Amaran L., Samulski R.J. AAV vectors: The Rubik’s cube of human gene therapy. Mol. Ther. 2022;30(12):3515–3541. DOI: 10.1016/j.ymthe.2022.09.015.Pupo A., Fernández A., Low S.H., François A., Suarez-Amaran L., Samulski R.J. AAV vectors: The Rubik’s cube of human gene therapy. Mol. Ther. 2022;30(12):3515–3541. DOI: 10.1016/j.ymthe.2022.09.015.Batista A.R., King O.D., Reardon C.P., Davis C., Shankaracharya, Philip V. et al. Ly6a differential expression in bloodbrain barrier is responsible for strain specific central nervous system transduction profile of AAV-PHP.B. Hum. Gene Ther. 2020;31(1–2):90–102. DOI: 10.1089/hum.2019.186.Batista A.R., King O.D., Reardon C.P., Davis C., Shankaracharya, Philip V. et al. Ly6a differential expression in bloodbrain barrier is responsible for strain specific central nervous system transduction profile of AAV-PHP.B. Hum. Gene Ther. 2020;31(1–2):90–102. DOI: 10.1089/hum.2019.186.Walkey C.J., Snow K.J., Bulcha J., Cox A.R., Martinez A.E., Ljungberg M.C. et al. A comprehensive atlas of AAV tropism in the mouse. Mol. Ther. 2025;33(3):1282–1299. DOI: 10.1016/j.ymthe.2025.01.041.Walkey C.J., Snow K.J., Bulcha J., Cox A.R., Martinez A.E., Ljungberg M.C. et al. A comprehensive atlas of AAV tropism in the mouse. Mol. Ther. 2025;33(3):1282–1299. DOI: 10.1016/j.ymthe.2025.01.041.Zhao J., Yue Y., Patel A., Wasala L., Karp J.F., Zhang K. et al. High-resolution histological landscape of AAV DNA distribution in cellular compartments and tissues following local and systemic injection. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2020;18:856–868. DOI: 10.1016/j.omtm.2020.08.006.Zhao J., Yue Y., Patel A., Wasala L., Karp J.F., Zhang K. et al. High-resolution histological landscape of AAV DNA distribution in cellular compartments and tissues following local and systemic injection. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2020;18:856–868. DOI: 10.1016/j.omtm.2020.08.006.Sarkar R., Xiao W., Kazazian H.H. A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor VIII vector partially corrects the hemophilia A phenotype. J. Thromb. Haemost. 2003;1(2):220–226. DOI: 10.1046/j.1538-7836.2003.00096.x.Sarkar R., Xiao W., Kazazian H.H. A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor VIII vector partially corrects the hemophilia A phenotype. J. Thromb. Haemost. 2003;1(2):220–226. DOI: 10.1046/j.1538-7836.2003.00096.x.Ferla R., Alliegro M., Marteau J.B., Dell’Anno M., Nusco E., Pouillot S. et al. Non-clinical safety and efficacy of an AAV2/8 vector administered intravenously for treatment of mucopolysaccharidosis type VI. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2017;6:143–158. DOI: 10.1016/j.omtm.2017.07.004.Ferla R., Alliegro M., Marteau J.B., Dell’Anno M., Nusco E., Pouillot S. et al. Non-clinical safety and efficacy of an AAV2/8 vector administered intravenously for treatment of mucopolysaccharidosis type VI. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2017;6:143–158. DOI: 10.1016/j.omtm.2017.07.004.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.