Антиагрегантная и антикоагулянтная активность 7-О-гентиобиозида формононетина в условиях in vitro и in vivo

Цель. В экспериментах in vitro и in vivo исследовать влияние изофлавоноида 7-О-гентиобиозида формононетина (ГБФ), выделенного из корней растения маакия амурская (Maackia amurensis Rupr. et Maxim.), на показатели сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза.

Материал и методы. В экспериментах in vitro использовалась плазма крови 19 практически здоровых добровольцев обоего пола в возрасте 23–34 года, не принимавших каких-либо лекарственных препаратов на протяжении как минимум 2 нед до забора крови. Изучение ГБФ проводилось с применением обедненной или обогащенной тромбоцитами плазмы, полученной в соответствии с имеющимися рекомендациями. В контрольных исследованиях применялась та же плазма, но с добавлением растворителя в конечных концентрациях 1,25– 2,5%. В качестве объекта сравнения в ходе изучения влияния ГБФ на коагуляционный гемостаз использовали гепаринизированную плазму крови человека с конечной концентрацией нефракционированного гепарина 0,2–0,5 МЕ/мл. Исследования in vivo выполнены на аутбредных крысах сток Wistar обоего пола массой 220–270 г. На протяжении всего периода наблюдения животные находились в условиях свободного доступа к воде и пище при нормальном чередовании светлого и темного времени суток. Для изучения влияния длительного введения ГБФ на показатели сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза животные были разделены на четыре группы по 10–12 крыс в каждой. Первой и второй группам крыс на протяжении 10 сут перорально вводили ГБФ в виде крахмальной взвеси в дозе 25 мг/кг массы тела. Полученные результаты сравнивали с соответствующими показателями контрольных животных (третья и четвертая группы), которые в течение такого же периода времени получали эквиобъемные количества крахмальной слизи.

Результаты. В опытах с использованием плазмы крови здоровых людей ГБФ в концентрациях 1,0–50,0 мМ способствовал дозозависимому ослаблению индуцируемой аденозиндифосфатом (АДФ) агрегации тромбоцитов. В концентрации 50,0 мМ ГБФ вызывал гипокоагуляционные сдвиги в плазме крови, сопоставимые с действием 0,2–0,5 МЕ/мл гепарина. Выявленный гипокоагуляционный эффект подтвердился при применении тромбоэластометрии, демонстрируя выраженную гипокоагуляцию и существенное снижение динамики фибринообразования. При хроническом энтеральном введении ГБФ крысам в дозе 25 мг/кг было зафиксировано почти 10-кратное снижение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов на фоне увеличения содержания этих клеток в периферической крови. Кроме того, в этих условиях наблюдался выраженный гипоко-агуляционный эффект ГБФ, который реализовывался в торможении реакций внутреннего и внешнего путей свертываемости крови, снижении скорости образования фибрина и его механической плотности.

Заключение. В экспериментах in vitro и in vivo впервые выявлена способность изофлавоноида 7-О-гентиобиозида формононетина, выделенного из корней маакии амурской, ингибировать показатели сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза. Этот факт имеет важное практическое значение, поскольку открывает перспективу создания нового лекарственного средства, способного уменьшить вероятность возникновения тромбозов при различных сердечно-сосудистых заболеваниях.

1. Upadhyay S., Dixit M. Role of polyphenols and other phytochemicals on molecular signaling // Oxid. Med. Cell. Longev. doi: /10.1155/2015/504253. Epub. 2015. Jun 9.

2. Новотный Дж.А. Антоцианины, флавоноиды и сердечно-сосудистые заболевания // Вопросы диетологии. 2014; 4 (3): 28–31.

3. Воробьева Е.Н., Фомичева М.Л., Воробьев Р.И. и др. Алиментарные факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний и их коррекция // Атеросклероз. 2015; 1: 68–73.

4. Jacques P.F., Cassidy A., Peterson J.J., Dwyer J.T. Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort // Br. J. Nutr. 2015; 114 (9): 1496 – 1503. doi: 10.1017/S0007114515003141. Epub. 2015. Sep 3.

5. Fedoreev S.A., Kulesh N.I., Glebko L.I. et al. Maksar: a preparation based on Amur Maackia // Pharm. Chem. J. 2004; 38: 605–610.

6. Федореев С.А., Кулеш Н.И., Мищенко Н.П. и др. Средство, обладающее противоопухолевой активностью. Патент 2414920 РФ. Бюлл. № 9, 27.03.2011.

7. Плотникова А.М., Шульгау Ç.Т., Плотникова Т.М. Антитромбогенная и антитромбоцитарная активность ýкстракта из древесины маакии амурской // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2009; 147 (2): 164–167.

8. Kulesh N.I., Fedoreyev S.A., Veselova V.M. et al. Antioxidant Activity of the Isoflavonoids from the Roots of Maackia amurensis // Nat. Prod. Comm. 2013; 8 (5): 589–592.

9. Кушнерова Н.Ф., Федореев С.А., Фоменко С.Е. и др. Гепатопротекторные свойства изофлавоноидов из корней Maackia amurensis при ýкспериментальном поражении печени четыреххлористым углеродом // Эксперим. и клин. фармакол. 2014; 77 (2): 26−30.

10. Çамятина С.В., Çверев Я.Ф., Кулеш Н.И., Федореев С.А. Средство, обладающее антиагрегантной и антикоагулянтной активностью. Патент 2573379 РФ. Бюлл. № 2, 12.08.2016.

11. Баркаган Ç.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Издание 3-е. М.: Ньюдиамед, 2008: 292.

12. Мамаев А.Н., Гильманов А.Ж., Вавилова Т.В., Момот А.П. Преаналитический ýтап исследования системы гемостаза // Клин. лаб. диагностика. 2011; 4: 35–39.

13. Anischenko A.M. Hemoreological effects of complex isoflavonoid preparation in ovariectomized rats // Bull. Exp. Biol. Med. 2013; 154 (6): 755–757.

14. Fuentes E., Palomo I. Antiplatelet effects of natural bioactive compounds by multiple targets: Food and drug interactions // J. Funct. Foods. 2014; 6: 73– 81.

15. Karlíčkova J., Říha M., Filipský T. et al. Antiplatelet effects of flavonoids mediated by inhibition of arachidonic acid based pathway. Published on-line. Planta med © Georg Thieme Verlag KG Stuttgart New York ISSN 0032-0943. doi:10.1055/s-0035-1557902.

16. Navarro-Nuсez L., Lozano M.L., Palomo M. et al. Apigenin inhibits platelet adhesion and thrombus formation and synergizes with aspirin in the suppression of the arachidonic acid pathway // J. Agric. Food Chem. 2008; 56 (9): 2970–2976. doi: 10.1021/jf0723209. Epub. 2008. Apr 15.

17. Navarro-Nuсez L., Castillo J., Lozano M.L. et al. Thromboxane A2 receptor antagonism by flavonoids: structure- activity relationships // J. Agric. Food Chem. 2009; 57 (4): 1589– 1594. doi: 10.1021/jf803041k.

18. Mozzicafreddo M., Cuccioloni M., Eleuteri A.M. et al. Flavonoids inhibit the amidolytic activity of human thrombin // Biochimie. 2006; 88 (9): 1297–1306. Epub. 2006. Apr 27.

19. Bijak M., Saluk J., Ponczek M.B., Nowak P. Antithrombin effect of polyphenol-rich extracts from black chokeberry and grape seeds // Phytother. Rec. 2013; 27 (1): 71–76. doi: 10.1002/ptr.4682. Epub. 2012. Apr 4.

20. Mira A., Alkhiary W., Shimizu K. Antiplatelet and anticoagulant activities of Angelica shikokiana extract and its isolated compounds // Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2015: 1–9. doi: 10.1177/1076029615595879. Epub. 2015. Jul 15.

21. Бышевский А.Ш., Умутбаева М.К., Алборов Р.Г. Связь гемостаза с перекисным окислением липидов. М.: Мед. книга, 2003: 95.

22. Cuccioloni M., Mozzicafreddo M., Bonfili L. et al. Natural occuring polyphenols as template for drug design. Focus on serine proteases // Chem. Biol. Drug Des. 2009; 74(1): 1–15. doi: 10.1111/j.1747-0285.2009.00836.x.

23. Gunnarson G.T., Riaz M., Adams J., Desai U.R. Synthesis of per-sulfated flavonoids using 2,2,2-trichloro ethyl protecting group and their factor Xa inhibition potential // Bioorg. Med. Chem. 2005; 13 (5): 1783–1789.

24. Correia-da-Silva M., Susa E., Duarte B. et al. Flavonoids with an oligopolysulfated moiety: a new class of anticoagulant agents // J. Med. Chem. 2011; 54 (1): 95–106. doi: 10.1021/jm1013117. Epub. 2010. Dec 7.

25. Bijak M., Ponczek M.B., Nowak P. Polyphenol compounds belonging to flavonoids inhibit activity of coagulation factor X. Intern // J. Biol. Macromol. 2014; 65: 129–135. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2014.01.023. Epub. 2014. Jan 18.

26. Cuccioloni M., Mozzicafreddo M., Sparapani L. et al. Pomegranate fruit components modulate human thrombin // Fitoterapia. 2009; 80 (5): 301–305. doi: 10.1016/j. fitote.2009.03.009. Epub. 2009. Apr 7.

27. Pawlaczyk I., Czerchawski L.,Kuliczkowski W. et al. Anticoagulant and anti-platelet of polyphenolic-polysaccharide preparation isolated from the medicinal plant Erigeron canadensis L. // Thromb. Res. 2011; 124 (4): 328–340. doi: 10.1016/j.thromres.2010.11.031. Epub. 2010. Dec 18.

28. Liu L., Ma H., Yang N. et al. A series of natural flavonoids as thrombin inhibitors: structure-activity relationships // Thromb. Res. 2010; 126 (5): e365-e378. doi: 10.1016/j.thromres.2010.08.006. Epub. 2010. Sep 15.

29. Bijak M., Ziewiecki R., Saluk J. et al. Thrombin inhibitory activity of some polyphenolic compounds // Med. Chem. Res. 2014; 23: 2324–2337. Epub. 2013. Oct 16.