Фенольные соединения этанольных извлечений Lemna minor L., Lemna trisulca L. и Lemna polyrrhiza L. Schleid. и их иммуномодулирующая активность

Цель исследования. Определение состава фенольных соединений этанольных извлечений, выделенных из трех видов ряски: ряски малой (Lemna minor L.), ряски тройчатой (Lemna trisulca L.) и ряски многокорневой (Lemna polyrrhiza L., синоним Spirodella polyrrhiza L.) Schleid.), и изучение его влияния на активацию системы иммунитета.
Материал и методы. Объект исследования: воздушно-сухие образцы травы ряски малой (Lemna minor L.), ряски тройчатой (Lemna trisuica L.) и ряски многокорневой (Lemna polyrrhiza L.), собранные в период их вегетации в 2010–2011 гг. в малопроточных и стоячих водоемах Кожевниковского и Томского районов Томской области. Выделение полифенольных комплексов (ПФК) проводили экстракцией воздушно-сухого сырья спиртом этиловым. При качественном и количественном анализе исследуемых образцов применяли метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии на приборе Agilent 1100 Series (США) в изократическом режиме. В экспериментах для определения иммуномодулирующей активности использовали 200 самцов мышей линий С57ВL/6 и BALB/C в возрасте 8–12 нед. Пролиферацию клеток оценивали колориметрическим методом. Абсорбцию полученных растворов замеряли при помощи многоканального спектрофотометра при длине волны 540 нм. Определение антителообразующих клеток в селезенке проводили методом локального гемолиза. Титр антител в сыворотке крови оценивали в реакции гемагглютинации. Локальную реакцию гиперчувствительности немедленного типа оценивали по методике в авторской модификации.
Результаты. Впервые проведено исследование качественного состава и количественного содержания ПФК ряски малой Lemna minor L. (LM), ряски трисульки Lemna trisulca L. (LT) и ряски многокорневой Lemna polyrrhiza L.(LP): (4,7 ± 0,4)%, (3,3 ± 0,3)%, (12,8 ± 0,7)% соответственно. Наибольшее содержание фенолокислот (10,76%) и суммы флавоноидов, изофлавоноидов и кумаринов (14,7%) обнаружено в образце LP. Содержание хлорогеновой и 3,5-дигидроксибензойной кислот в 2–9 раз больше в LP, чем других видах ряски. LM, LT в концентрации 5 мкг/мл и LP в диапазоне 0,5–160 мкг/мл не оказывают токсического действия на антигенпрезентирующие клетки. При инкубации с LT (20 мкг/мл) пролиферация макрофагов снижается в 1,2 раза, а при инкубации с LM и LT (80 мкг/мл) в 1,2 и 1,8 раза соответственно. ПФК ряски многокорневой (LP) не оказывают подобного эффекта. LM и LP оказывают стимулирующее действие на продукцию нитритов в концентрациях 5 и 20 мкг/мл, усиливая ее в 1,3–1,6 раза. Курсовое введение LT и LP приводит к достоверному снижению числа антителобразующих клеток в 1,5 и 2,3 раза и уменьшению величины локальной реакции гиперчувствительности в 1,9 и 1,5 раза соответственно.

1. Маркова А. Травник. Çолотые рецепты народной медицины. М.: Эксмо-Форум, 2007: 928.

2. Никифоров Л.А., Фурса Н.С., Кривощеков С.В., Куркин В.А., Белоусов М.В. Сравнительное исследование веществ первичного обмена ряски малой (Lemna minor L.), ряски тройчатой (Lemna trisulca L.) и многокоренника обыкновенного (Spirodella polyrrhiza L. Schleid.) // Бюллетень сибирской медицины. 2017; 16 (1): 59–64. DOI:10.20538/1682-0363-2017-1-59-64.

3. Schepetkin I.A., Ramstead A.G., Kirpotina L.N., Voyich J.M., Jutila M.A., Quinn M.T. Therapeutic Potential of Polyphenols from Epilobium Angustifolium (Fireweed) // Phytotherapy Research: PTR. 2016; 30 (8): 1287–1297.

4. Williamson G., Manach C. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. II. Review of 93 intervention studies. // The American Journal of Clinical Nutrition. 2005; 81 (1 Suppl): 243S–255S.

5. Wang F., Xue Y., Yang J., Lin F., Sun Y., Li T., Wu C. Hepatoprotective effect of apple polyphenols against concanavalin A-induced immunological liver injury in mice // Chemico-biological Interactions. 2016; 258: 159–165.

6. Гилязова А.В., Корнилаева Г.В., Хаметова К.М., Салихов Ш.И., Мавлянов С.М., Карамов Э.В. Сравнительный анализ активности растительных фенолов по ингибированию ВИЧ-инфекции в Т-лимфобластоидной клеточной линии и мононуклеарах периферической крови // Иммунология. 2011; (1)32: 4–6.

7. Sadowska B., Micota B., Różalski M., Redzynia M., Różalski M. The immunomodulatory potential of Leonurus cardiaca extract in relation to endothelial cells and platelets // Innate Immunity. 2017; 23 (3): 285–295.

8. Шукшина О. Г., Масная Н.В., Исайкина Н.В., Шерстобоев Е. Ю., Калинкина Г.И. Влияние растительных фенольных комплексов на функциональную активность иммунокомпетентных клеток in vitro // Иммунология. 2014; 3 (35): 138–142.

9. Lee N., Shin M.S., Kang Y., Park K., Maeda T., Nishioka H., Fujii H., Kang I. Oligonol, a lychee fruit-derived low-molecular form of polyphenol mixture, suppresses inflammatory cytokine production from human monocytes // Human Immunology. 2016; 77(6): 512–515.

10. Williams A.R., Klaver E.J., Laan L.C., Ramsay A., Fryganas C., Difborg R., Kringel H., Reed J.D., Mueller-Harvey I., Skov S., van Die I., Thamsborg S.M. Co-operative suppression of inflammatory responses in human dendritic cells by plant proanthocyanidins and products from the parasitic nematode Trichuris suis // Immunology. 2017; 150 (3): 312–328.

11. Huang R.Y., Yu Y.L., Cheng W.C., OuYang C.N., Fu E., Chu C.L. Immunosuppressive effect of quercetin on dendritic cell activation and function // Journal of Immunology. 2010; 184 (12): 6815–6821.

12. Pérez-Cano F.J., Castell M. Flavonoids, Inflammation and Immune System // Nutrients. 2016; 8 (10): 659.

13. Погодин И.С., Лукша Е.А., Нурмухаметова К.А., Адекенов С.М., Ивасенко С.А. Фитохимическое исследование надземной части соссюреи горькой (Saussurea amara L.) // Омский научный вестник. 2010; 1 (194): 115–118.

14. Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J. et al. Analysis of nitrate, nitrite and [15N] nitrite in biological fluids // Anal. Biochem. 1982; 126: 131–143.

15. Munder M., Eichmann K., Modolell M. Alternative metabolic states in murine macrophages reflected by the nitric oxide synthase/arginase balance: competitive regulation by CD4+ T cells correlates with Th1/Th2 phenotype // J. Immunol. 1998; 11(160): 5347–5354.

16. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. 1. М.: Гриф и К, 2013: 64–79.

17. Емельяненко И.Н., Душкин В.А. Характеристика общей анафилаксии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1971; 10: 69–71.

18. Laria A., Lurati A., Marrazza M., Mazzocchi D., Re K.A., Scarpellini M. The macrophages in rheumatic diseases // J. Inflamm. Res. 2016; 9: 1–11.

19. Kreider T., Anthony R.M., Urban J.F.Jr., Gause W.C. Alternatively activated macrophages in helminth infections // Curr. Opin. Immunol. 2007; 19: 448–453.